eif4g1非小细胞肺癌生物学功能影响的研究-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

目 录 一、摘要 1 (一)中文摘要 1 (二)英文摘要 3 二、正文 5 (一)前言 5 (二)材料和方法 6 1．材料 ．．6 2．方法 1 1 3．统计学方法 21 (三)结果 ．．22 (四)讨论 ．．33 (五)结论 ．．34 (六)参考文献 ．．35 三、综述 40 (一)综述 40 (二)参考文献 45 四、攻读学位期间发表文章情况 ．．50 五、致谢 ．5 1 万方数据  大连医科大学硕士学位论文 E l F4G1对非小细胞肺癌生物学功能影响的研究 摘要 目的：肺癌是世界上许多国家最常见的恶性肿瘤之一，在我国，肺癌居恶性肿瘤 死因首位。肺癌可分为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)和 小细胞肺癌(smal l cel l lung cancer，SCLC)两大类，其中非小细胞肺癌(NSCLC) 占所有肺癌病例的80％,--85％，其中只有15-25％的非小细胞肺癌有手术治疗的机 会，而即使接受根治性手术治疗，仍然有50％的NSCLC患者会复发，而随着近几 年转化医学的研究推进，研究了一些肿瘤检测方法和靶点，开发出了一些靶向性 药物。EIF4G1(eukaryotic translation initiation factor 4 gamma 1，真核 翻译起始因子4G1)最初发现是作为翻译起始因子复合物EIF4F的组成蛋白之一。 该复合物最重要的功能是将mRNA募集到核糖体上，这是蛋白质合成起始步骤。在 蛋白质翻译这一生理过程中，EIF4G1作为一个支架蛋白，使其它与翻译起始有关 的因子与之结合而发挥各自的作用。近年来的研究表明，EIF4G1除了促进蛋白翻 译外，也与肿瘤的发生、进展密切相关。大量研究表明，EIF4G1在鼻咽癌，乳腺 癌，鳞状细胞癌中均有高表达。有报导显示EIF4G1位于染色体3q27上，该区域 在50％的肺癌中被检测到有非正常的扩增，EIF4G1可能是一种检测NSCLC的潜在 分子标记物，至今为止，没有研究显示NSCLC中过量表达得EIF4G1与NSCLC细 胞侵袭及转移的相关性，也未见EIF4G1是否参与NSCLC发生及发展过程的研究报 道。本文采用RNAi技术，高效特异性的干扰EIF4G1在非小细胞肺癌细胞株中的 表达，建立稳定表达EIF4G1一shRNA的非小细胞肺癌细胞株，研究EIF4G1对非小 细胞肺癌细胞株生物学功能的影响，为非小细胞肺癌的治疗提供新的思路。 方法：(1)应用Westernblot技术，分别检测EIF4G1在正常肺上皮细胞株16HBE 与NSCLC细胞株、非小细胞肺癌病人癌旁组织与癌组织中的表达情况。确认EIF4G1 与NSCLC发生的正相关关系。(2)利用RNAi技术，干扰EIF4G1在非小细胞肺癌 细胞中的表达，通过cck8、流式细胞术、细胞克隆、thanswell和划痕等一系列 体外实验，探讨EIF4G1对非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡、周期、迁移、侵袭等 生物学功能的影响。(3)利用共聚焦显微镜与免疫共沉淀技术，检测EIF4G1与 USPIO相互作用及其对非小细胞肺癌功能的影响。 万方数据  大连医科大学硕士学位论文 结果：(1)通过免疫印迹方法，检测出EIF4G1分别在非小细胞肺癌细胞株与组 织中的表达要高于正常肺上皮细胞株与癌旁组织。(2)在非小细胞肺癌细胞株中 通过敲低EIF4G1，可以发现细胞的生长、增殖、迁移、侵袭与对照细胞相比受到 了明显的抑制，通过流式细胞技术，观察到敲低EIF4G1后，促进了细胞的凋亡及 产生了GOGl期的阻滞。(3)通过免疫共沉淀技术，验证了EIF4G1与USPIO (Ubiquitin—specific protease 10，泛素化特异性蛋白酶10)的相互作用，并 通过共聚焦显微镜对这两个蛋白进行共定位，EIF4G1与USPIO共定位在细胞质。 (4)通过慢病毒包装系统构建同时敲低USPIO与EIF461的稳转细胞系，与对照 细胞(只敲低EIF461基因)相比， USPIO负调控EIF4G1介导的的细胞生长、增 殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学功能的影响。 结论：通过免疫印迹的方法，证实了EIF4G1在非小细胞肺癌中过表达，通过RNAi 技术，确定了EIF4G1对非小细胞肺癌生物学功能的影响。通过免疫共沉淀验证了 EIF4G1与USPIO的相互作用以及两者相互作用调控非小细胞肺癌的生物学功能。 为非小细胞肺癌的治疗提供了新的潜在靶点。 关键词：EIF4G1[ISPIO非小细胞肺癌肺癌 万方数据  大连医科大学硕士学位论文 Functional Role of Eukaryotic Translation Initiation Factor 4 Gam