eb毒lmp1调控op18stathmin信号传导机制的研究.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 学，在细胞生物学性状的维持方面发挥重要作用。 Opl8／stathmin磷酸化与去磷酸化与细胞周期的进程密切相关， 受细胞周期及与细胞周期相关的多种激酶调控。在LMPl调控的虚拟 信号网络中，我们发现LMPl有可能通过MAPK与cdc2介导 Op 1 8／stathmin的信号通路的调控。 MAPK是一类Ser／Thr蛋白激酶，是细胞内信号传导链的重要整 合点，诱导细胞增殖、分化与生存。MAPK与野生型与突变型0p18 均能结合。Opl 8的两个磷酸化位点Ser25／Ser38后都带有一个脯氨酸 残基，成为合适的MAPK底物，MAPK家族中3个亚家族ERK、JNK、 p38活化后，均能磷酸化Opl 8 Ser25／Ser38位点。 Cdc2是一个典型的推动细胞周期演进的正性调控因子，是M期 事件启动和进行的必要条件。ode2激酶活性与cyclinBl周期性生产， 累积和降解机制有关，有明显的细胞周期依赖性。cdc2激酶可以直接 磷酸化Opl8／stathmin的Ser25／Ser38位点，当opl8．25A／38A靶点突 变，会导致缺陷细胞快速向G2期聚集，引起有丝分裂M期染色体分 离缺陷。 确立LMPl通过MAPK与cdc2介导的对Opl8／stathmin信号通 路，将进一步完善了LMPl信号通路的调控网络，确立Opl8／stathmin 为LMPl的一个新的效应分子提供分子证据，对阐明LMPl在癌变 中的分子机制有重要的意义。 1．LMPl对Opl8／stathmin表达与磷酸化调节 CNEl是LMPl阴性的鼻咽癌细胞，CNEl．LMPl是稳定表达 LMPl的鼻咽癌低分化鳞状癌细胞；LMPl受DOX诱导表达的 Tet．on．LMPl．HNE2鼻咽癌细胞；来源于SV40T转化的永生化鼻咽部 上皮细胞NP69、NP69．PLNSX、NP69．LMPl的NP69细胞系列。通 过不同细胞株的研究表明，鼻咽癌细胞与人永生化鼻咽部细胞，LMPl 对Opl8／stathmin表达没有影响，也没有时间与剂量依赖性；LMPl II 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 显著诱导Opl8／stathmin磷酸化水平上调；但在鼻咽部黏膜上皮细胞 转化的永生化细胞NP69系列，LMPl诱导Opl8／stathmin磷酸化改变 不明显。LMPl调节Opl8／stathmin主要通过影响Opl8／stathmin磷酸 化实现的，其对肿瘤细胞与永生化的细胞作用机制可能存在一定的差 异。 2．LMPl通过MAPK对Opl8／stathmin信号通路的调控 在鼻咽癌细胞中，LMPl能否通J龇APK调控Opl8／stathmin信号通 路。LMPl阴性的CNEl与稳定表达LMPl的CNEl．LMPl鼻咽癌低分 化鳞状癌细胞系，通过细胞同步化，特异阻断MAPK信号通路，免疫 共沉淀，可溶性与聚合性微管蛋白的萃取，Western-blot分析等方法， 研究LMPl对MAPK激酶活性影响，MAPK与Opl8／stathmin相互作用 的改变，微管动力学变化，及LMPl调控MAPK活性改变与细胞周期 的相关性。 研究发现，当细胞绝大部分处于G1／S期，LMPl上调p38、ERK、 JNK／MAPK磷酸化，其中ERK磷酸化水平显著升高；当绝大部分细 胞处于G2／M期时，与G1／S期刚好相反，LMPl负性调控p38、ERK 和JNK／MAPK激酶磷酸化，ERK磷酸化水平下降最为显著。 为了证实Opl8／stathmin失稳定微管的活性，我们设计了靶向 Opl 8／stathmin的siRNA重组载体，观察在Opl 8／stathmin基因表达被 抑制情况下，微管动力学的改变。研究发现，RNAi有效抑制 Opl8／stathmin转录及Opl8／stathmin蛋白表达； 转染 pGCsi．U6／neo／GFP空白质粒与pGCsi．U6／neo／GFP．NON无意义质粒的 对照组中，可溶性微管蛋白水平无明显变化，但转染 pGCsi．U6／neo／GFP．RNAi质粒的处理组，可溶性微管蛋白水平明显下 降。证实，在鼻咽癌细胞