ecadherin在激素非依赖性前列腺癌的影响及意义.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 厦门大学 硕士学位论文 E-cadherin在激素非依赖性前列腺癌中的影响及意义 姓名：李水文 申请学位级别：硕士 专业：外科学 指导教师：白培明 201106 摘要 目的 通过实验探讨E_cadherin在激素非依赖性前列腺癌上的表达及基因启动子 CpG岛甲基化情况，并探讨甲基化抑制剂5一氮杂一2’一脱氧胞苷对激素非依赖性 前列腺痛细胞的影响及意义。 方法 从国内大型细胞库购买人前列腺癌细胞株和正常人前列腺上皮细胞株，进行 细胞培养。实验分3组：(1)正常对照组：正常人前列腺上皮细胞株RWPE-I；(2) 对照组：激素依赖性前列腺癌细胞株LnCaP；(3)实验组：激素非依赖性前列腺 癌细胞株PC-3。用MSP(甲基化特异性PCR)方法检测5一氮杂一2’一脱氧胞苷作 用前后三种细胞的E—cadherin基因启动子CpG岛的甲基化情况；用RT—PCR方法 检测5一氮杂一2 7一脱氧胞苷作用前后这三种细胞的E_cadherin mRNA转录情况； 再用Western blot技术检测相应的E_cadherin蛋白水平上的表达。比较各组细 胞E_cadherin表达的差异，以及在蛋白质及mRNA水平上的相关性。最后用 Transwell小室检测5一氮杂一2 7一脱氧胞苷作用后癌细胞侵袭性的改变。并进行 统计分析。 结果 1．MSP结果显示：正常人前列腺上皮细胞RWPE—l呈甲基化阴性，非甲基化强阳 性；LnCaP细胞的甲基化及非甲基化均呈阳性；PC-3细胞呈甲基化强阳性， 非甲基化阴性。使用含有浓度为lO灿mol／L的5一氮杂一2 7一脱氧胞苷培养基分 别培养72小时之后，正常前列腺上皮细胞仍呈甲基化阴性，非甲基化强阳 性；LnCaP细胞的甲基化较前减弱，非甲基化增强：PC-3细胞的甲基化程度 明显减弱，并出现较强的非甲基化。 。 2．RT—PCR结果显示：E_cadherin mRNA水平存在差异，在正常人前列腺上皮细 胞表达水平最高，且随着药物作用浓度的增加和作用时间的延长，其mRNA 未发现明显改变。LnCaP细胞中的E_cadherinmRNA水平次之，而PC一3细胞 则几乎不表达；同时，其mRNA的表达随着药物浓度的增加和作用时间的延  长而逐渐增强，其中又以PC-3细胞中增强最为明显。 3．Western blot结果显示：E—cadherin蛋白表达情况与mRNA表达结果相一致。 正常人前列腺上皮细胞随着药物浓度的增加和作用时间的延长，E cadherin 蛋白未发现明显改变。LnCaP细胞及PC-3细胞E—cadherin蛋白的表达随着 药物浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增强，其中PC一3细胞表现更为明 显。 4．侵袭性实验结果显示：正常人前列腺上皮细胞未发现侵袭性，PC-3细胞的侵 袭性明显高于LnCaP细胞。分别加入浓度为lOPmol／L的5一氮杂一2’一脱氧胞 苷作用72小时之后，LnCaP细胞的侵袭性下降，PC-3细胞的侵袭性明显下 降。 结论 1．激素非依赖性前列腺癌的E_cadherin基因启动予CpG岛存在明显的甲基化， E_cadherin的表达缺失。 2．5一氮杂一2 7一脱氧胞苷可降低激素非依赖性前列腺痛的启动子甲基化程度， 并促进E_cadheri n的表达。 3．5一氮杂一2，一脱氧胞苷可降低激素非依赖性前列腺癌细胞的侵袭性。 关键词激素非依赖性前列腺癌E_cadherin 甲基化5一氮杂一2’一脱氧胞苷 Ⅱ  Abstract oBJECTIVE： To investigate the expression and methylation of E_Cadherin in hormone independent prostate cancer(HIPC)cells by experiment．To explore the influence and significance of DNA methyltransferase inhibitor 5-Aza一2’-deoxycytidine (5-Aza—CdR)on hormone independent prostate cancer(HIPC)cells． METHoDS： The cells was divided into three groups：(1)normal control：normal human prostate epithelial cell line RWPE-1；(2)control group：hormone dependent prostate cancer cell line LNCaP；(3)experimental gro