miR203和ZB2直接相互作用抑制EMT信号通路减少肺腺癌化疗耐药.docx

!||IIIIII !||IIIIII I 111 11111 IIIII III 、一Y31 1邸0墨一j 博士学位论文 m i R-203和ZEB2直接相互作用抑制EMT信号 通路减少肺腺癌化疗耐药 博士研究生：段训凰 指导教师：罗荣城教授 方唯意教授 摘要 研究背景与目的 支气管肺癌是目前世界上因恶性肿瘤而死亡的主要肿瘤之一，在过去的20 年中，我国大中城市肺癌的发病率亦呈逐渐上升的趋势，其中非小细胞肺癌约 占80％--85％。而肺腺癌在一些发达国家已成为最常见的肺癌类型，在我国其发 生率也逐年上升，并已经超过肺鳞癌成为最常见的非小细胞肺癌，肿瘤可发生 在各级支气管，但以小支气管为多，因此以周围型肿块多见。因临床症状就诊 的非小细胞肺癌患者中，在确诊时约20％--30％为I期和II期，40％--50％为III 期，30％为Ⅳ期。目前以手术为主的综合治疗仍然是非小细胞肺癌的治疗模式。 而早期或可手术治疗的局部晚期非小细胞肺癌在手术治疗后仍然有较高的复发 率和远处转移率。不可手术切除和术后复发的非小细胞肺癌患者有一大部分患 者需要接受化学药物治疗或针对驱动基因的靶向治疗。因此，化疗是非小细胞 肺癌治疗的重要基石，其中，顺铂是我国最常用的铂类化疗药物之一，在治疗 过程中容易出现化疗耐药或复发导致治疗失败。化疗耐药的出现是目前治疗失 败的主要模式之一， 使得肺癌总体疗效差，生存期短。 随着药物化学和分子生物学研究的进一步深入，一些已知化疗药物耐药的 分子机理基本阐明，主要包括药物靶点表达的改变与增强、药物进入靶细胞受 阻、药物代谢排泄增加与失活、细胞DNA损伤及错配修复增强、靶细胞凋亡减 万方数据 摘要 摘要 少、药物代谢改变以及药物诱导的细胞核型改变等相关。有研究表明miRNA在 肿瘤药物的代谢中起着重要的调节作用，因此可以通过研究调节miRNA的表达 从而干预化疗耐药的机制的发生，包括miRNA多态性、参与调控耐药基因的表 达等。 miR-203(微小RNA．203)是一类非编码的长链小RNA，属于miRNA表达 谱中的一员，被认为是一种调节因子，用以调节基因表达，通过靶mRNA分子 的3’非编码区，促使靶mRNA的降解产生基因调控作用或在翻译水平上特异 性抑制基因表达。miRNA．203对构建皮肤保护层、参与胚胎期表皮分化的调控 中起着调节作用，并且与上皮组织肿瘤、牛皮癣、银屑病等皮肤性疾病的病理、 生理过程中发挥着重要的作用。miRNA．203作为抑癌或致癌因子，其在与靶基 因共同作用，来参与肿瘤细胞生成、增殖分化、侵袭转移，以及凋亡等。有文 献报道miRNA．203在头颈部鳞状细胞癌、呼吸系统肿瘤如非小细胞肺癌、消化 系统肿瘤如胃癌、肝癌、结直肠癌、泌尿系肿瘤如前列腺癌、血液系统肿瘤如 慢性髓系白血病和B细胞白血病的肿瘤细胞生成等肿瘤中存在表达和功能调节。 同时亦有研究发现调节miR-203在不同肿瘤组织中的表达，从而改变肿瘤细胞 的代谢与功能，有望成为精准医学时代下恶性肿瘤的一种新的预测标记物，也 可能成为一个潜在的治疗靶点，用以指导肿瘤的个体化、精准化治疗策略。 目前有研究者通过108例采用顺铂化疗的膀胱癌患的肿瘤组织及体外膀胱 癌细胞检测miR．203表达水平，结果发现，在膀胱癌进展期患者的miR-203表 达水平明显低于未进展的患者，并且可以预测和区分肿瘤是否进展。miR-203低 表达的患者的预后更差，表现在PFS及OS缩短，并可作为独立的预后预测因子。 在体外膀胱癌细胞研究中，高表达miR-203的细胞对顺铂更敏感，增加了顺铂 的药物杀伤作用，并促进细胞坏死和凋亡。同时也有研究者对miR-203在结直 肠癌采用奥沙利铂化疗耐药的研究显示，高表达的miR-203可以减少奥沙利铂 的药物毒性，增加产生化疗耐药，从而达到保护结直肠癌细胞，而通过抗miR-203 的表达可以逆转这一现象，从而降低奥沙利铂化疗耐药的产生。这一研究显示 了在不同的肿瘤及组织中，miR-203起着不同的作用和功能。 II 万方数据 博士学位论文ZEB2又叫ZFHXlB、SIP一1等，是由染色体2q22上的基因ZFHXlB所编码， 博士学位论文 ZEB2又叫ZFHXlB、SIP一1等，是由染色体2q22上的基因ZFHXlB所编码， 由8个内含子和9个外显子组成，CDS区为3572碱基对，属于锌指结构转录因 子中的E盒结合锌指蛋白(西ncfingerBbox—bindingwotein，ZEB)家族的成员。 ZEB2包含2个锌指簇(zinc．finger cluster)以及连接这两个锌指簇的可变序列， 其中，N端和C端中的每一个锌指结构都能够独立结合目的基因的受调节区域 中的5-CACCT(G)碱基序列。目前的研究揭示了ZEB2在胚