Genistein对HeLa细胞拓扑异构酶Ⅱα和SIRT1的抑制用及相关机制研究.docx

目 目 录 中文摘要 ．．． ．．1 英文摘要 ．6 英文缩写 ．1 2 研究论文genistein对HeLa细胞拓扑异构酶II a和SIRTl的抑制作用及相 关机制研究 引言 ． j 13 第一部分genistein对HeLa细胞生长的抑制作用 前言日U舌 ．． ． l166 材料与方法 ．．1 7 结果 20 附I药 2 1 附表 ．．26 讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．：26 硝、l右 3 1 参考文献 ．．． ．3 1 第二部分genistein对HeLa细胞拓扑异构酶II仅抑制作用及相关机制研究 前言日lJ舌 3535 材料与方法 36 结果 47 附l圈 48 附表 5 1 讨论 52 爿、结 ． ．． 。 ． ． ．． 。 ．． ．．54 参考文献 ．．54 第三部分genistein对HeLa细胞SIRTl的抑制作用及相关机制研究 前言月U舌 ．． ． ．． ． 6()60 材料与方法 ．6 1 结果 64 附图 ． ．． 66 附表 附表 70 讨论 7 l 小结 75 参考文献 75 综述一脱乙酰化酶sirtuins研究进展 78 综述二细胞周期与蛋白质乙酰化调节 ．．95 致谢．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．1 09 个人简历 110 中文摘要Genistein对HeLa细胞拓扑异构酶II 中文摘要 Genistein对HeLa细胞拓扑异构酶II a和 SIRTl的抑制作用及相关机制研究 摘 要 第一部分genistein对HeLa细胞生长的抑制作用 目的：子宫颈癌是常见的妇女癌症，根据统计显示：子宫颈癌发生率 的排名为女性癌症第一位，各个年龄层的女性都有可能发生子宫颈癌，但 以25岁到45岁的妇女最为常见。死亡率的排名则为女性癌症的第四位， 死亡人数占全部癌症死亡人数的4％。 genistein具有雌激素作用、抗氧化作用、防突变、防射线损伤、抗感 染、抗心脑血管病、抗骨质疏松等多种生理功效，近年来，genistein的抗 癌效应及其应用前景受到普遍关注。基础研究表明，genistein能够抑制肿 瘤细胞的生长、侵袭、并可加强其它抗癌药物的疗效、以及逆转肿瘤细胞 的耐药性、诱导肿瘤细胞凋亡、诱导肿瘤细胞分化等。 本研究将检测genistein对宫颈癌细胞株HeLa细胞生长的抑制作用， 并测定其对HeLa细胞的半数抑制浓度，同时检测genistein对HeLa细胞 细胞周期及凋亡的影响。 方法：先用MTT法测定不同浓度genistein对HeLa细胞作用24 h和 48h的吸光度值，计算不同浓度genistein对HeLa细胞的抑制率，并绘制 抑制率曲线，确定IC50值。然后以genistein IC50作用后，Hoechst 33258 荧光染色检测凋亡时细胞核形态变化，Annexin V-FITC和PI标记后采用 流式细胞术进一步定量检测凋亡细胞比例，同时检测细胞周期分布情况。 结果：genistein可以抑制HeLa细胞生长，并具有剂量和时间依赖性， 24 h半数抑制浓度为126 uM，48h半数抑制浓度为75uM。采用75uM genistein作用48 h后，Hoechst 33258染色可见凋亡细胞形态改变，且凋 亡细胞比率较对照组增加；Annexin V-FITC和PI标记后采用流式细胞术 进一步定量检测凋亡细胞，genistein作用组凋亡细胞比率明显增加；细胞 周期分析显示genistein作用后G2／M细胞明显增加，G0／G1期和S期细胞 比例没有明显改变，提示genistein使HeLa细胞周期阻滞于G2／M期。 结论：genistein能够抑制HeLa细胞增殖，且具有时间和剂量依赖性。 中文摘要以75uM 中文摘要 以75uM genistein作用48 h，能够引起细胞凋亡及细胞周期G2／M期阻滞。 第二部分genistein对HeLa细胞拓扑异构酶II a抑制作用及相关机制研究 目的：拓扑异构酶II(topoisomerase II，Topo II)是普遍存在的细胞核 酶，能够解开S期和G2／M期紧凑缠绕的DNA超螺旋结构，催化DNA 的超螺旋状态与解旋状态之间的相互转换，以便DNA复制、转录、修复