MiR181a通过靶向PRKCD调节颈癌放疗敏感性.docxVIP

MiR-181a通过靶向PRKCD调节宫颈癌放疗敏感性 摘要 目的：研究不同放疗敏感性的富颈癌组织中的miRNA表达的区别，筛选出放疗敏 感相关的miRNA，并且研究miRNA调节放疗敏感性的机制 材料和方法：假设miRNA能调节宫颈癌放疗敏感性，使用miRNA芯片筛选出不同 放疗敏感性的宫颈癌的miRNA的表达。Real--time PCR验证miRNA芯片筛选的 结果。根据差异表达的倍数和P值，挑选出miR--181a作为课题主要研究的miRNA。 选择放疗不敏感的宫颈癌细胞SiHa，放疗敏感的宫颈癌细胞Mel80作为课题研 究的细胞。miR一181a--mimic和miR一181a--inhibitor转染宫颈癌细胞后，克 隆形成实验检测放疗敏感性。用慢病毒载体构建稳定转染miR--181a的稳转株， 体外体内实验验证稳定转染株的放疗敏感性。增殖实验，周期实验，凋亡实验检 测miR—i81a调节放疗敏感性的可能机制。mRNA芯片和生物信息软件预测miR 一181a可能的靶基因。双荧光素酶实验验证靶基因。Real-time PCR，western blotting，克隆形成实验验证靶基因的表达和功能。 结果：我们采用miP,NA芯片技术筛选ll例放疗敏感和7例放疗抵抗的宫颈癌标 本中的miRNA表达谱，筛选出与放疗敏感相关的miRNA。结果我们筛选出8个与 放疗敏感相关的miRNA。挑选miRNA--181a作为我们研究的对象。过表达miR一 181a能抑制宫颈癌细胞的放疗敏感性，低表达miR-181a能促进宫颈癌细胞的 放疗敏感性。我们建立表达miR一181a的稳定转染株种植于裸鼠，体内实验验证 miR一181a能抑制宫颈癌细胞的放疗敏感性。通过mRNA芯片技术和生物信息软 件我们预测miR一181a的作用靶基因，PRKCD成为可能的靶基因。过表达miR一 181a能抑制宫颈癌细胞的PRKCD的表达，而低表达miR--181a能增加宫颈癌细 胞的PRKCD的表达。抑制宫颈癌细胞PRKCD的表达能抑制宫颈癌细胞的放疗敏感 性，并且促进宫颈癌细胞的PRKCD的表达能增加宫颈癌细胞的放疗敏感性。恢复 高表达miR一181a的富颈癌细胞株中的PRKCD的表达能逆转miR--181a对宫颈癌 细胞株对放疗抵抗作用。  结论：我们认为miR一18 1a能通过抑制靶基因PRKCD的表达来抑制宫颈癌的放疗 敏感性。 关键词：miR一181a放疗敏感性PRKCD凋亡 中图分类号：R73 2  miR-18 1a regulates radiosens i t iVity in cerv i cal cancer through target i Abstract Purpose：to study the relation between miRNA expression and radiosensitiVity in cervical cancer，we aim at finding certain miRNA to regulate radiosensitiVity and showing regulatory network． Methods and Materials：We hypothesize that miRNAs interconnect with mRNA involved in radiosensitiVity，which influence intrinsic radiosensitivity of tumor．we obtain the miRNAs associated likely with radiosensitivity though screening miRNAs expression profiling in radiosensitive and radioresistant human cervical cancer sample using microarray．In order to test the resul t of mieroarray，Real—t ime Polymerase Chain Reaction i s performed．Cervical cancer cell，SiHa and Mel80，are transfected by miR一181a—mimic，miR一181a-inhibitor．Stably transfection cell lines are constructed by Lentivirus vector carrying miR一181a．Colony—Formation Assay WaS performed to detect th