MAGe-在食管癌细胞系的表达和调节及其生物学作用机制的研究.docx

研究生签名酬研湃导师签章：年货恩；雩翥鬟篱≥河北医科大学 研究生签名酬研湃导师签章：年货恩；雩翥鬟篱≥ 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人己发表或撰写的研究 成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。 研究生签名溯 聊棒私g． ≤。{了年一譬月勺9日 万方数据 目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 7 英文缩写 ．1 4 研究论文MAGE．A在食管癌细胞系的表达和调节及其生物学作用机制 的研究 引言 ·1 6 第一部分MAGE．A在五种食管鳞状细胞癌细胞的基因表达谱 前言日U舌 · ．188 材料与方法 ·1 9 结果 ·26 附图 ．28 附表 ．3 1 讨论 ·32 小结 ·34 参考文献 ·35 第二部分地西他滨对Ecal09细胞MAGE—A表达的调节及其生物学影响 前言刖’舌 ．3。3 88 材料与方法 ·39 结果 ·54 附图 -56 附表 ·61 讨{仑 ．62 小结 ．65 参考文献 ．66 第三部分MAGE．A的生物学功能及其机制 前言日IJ舌 ．70‘70 材料与方法 ．72 结果 ．88 附图 ．91 万方数据 讨论 讨论 1 oo 小结 1 03 参考文献 1 05 结论 1 1 1 综述MAGE．A食管癌免疫治疗新靶点 。1 12 致谢 123 个人简历 124 万方数据 中文摘要MAGE—A在食管癌细胞系的表达和调节及其 中文摘要 MAGE—A在食管癌细胞系的表达和调节及其 生物学作用机制的研究 摘 要 食管癌是世界上高恶性度的肿瘤之一，其肿瘤发病率排名第八，肿瘤 相关病死率排名第六。全世界每年大约有450000人患食管癌，尤其在南 美洲和亚洲地区，特别是日本和中国，有较高的发病率。食管癌的局部侵 润和远处转移是引发该病死亡率的主要原因。由于该病不易发现，多数患 者在临床确诊时，肿瘤己无法切除，或可见远端转移灶，无法采用手术治 疗，因此该病发病率接近死亡率，其5年生存率也较低，约为15％。在中 国和其他的亚洲国家，食管鳞状细胞癌是最普遍的病理类型。尽管随着科 学的发展，手术、放疗和化疗有了很大的进步，但对于提高食管癌患者总 体生存率方面并没有明显的效果，因此期待新的治疗策略。 目前，肿瘤免疫治疗已经成为肿瘤治疗的新趋势，是继手术、化疗和 放疗后的又一种肿瘤治疗模式。该方法创伤小、针对性强，尤其对于手术疗 效不佳的肿瘤，可能成为一种较好的选择。识别高效特异的靶抗原是肿瘤 免疫治疗的关键一步。高效特异性肿瘤抗原必须在肿瘤组织中高表达，且 在正常组织中无表达，即表达具有高度限制性，才能避免肿瘤免疫治疗过 程中发生自身免疫性疾病。癌睾丸抗原(CTA)，因其特异性表达模式成为 肿瘤免疫治疗的理想靶点，其广泛表达于各种肿瘤组织中，而在正常组织 中仅表达于睾丸生殖细胞，偶而也表达于胎盘组织。由于睾丸是免疫豁免 器官，不表达人类白细胞抗原(I-ILA)分子，不会引起机体特异性免疫反应。 因此CTA作为特异性肿瘤免疫治疗的靶点，有很好的应用前景。黑色素 瘤抗原基N(Melanoma—associated antigen gene，MAGE)，是CTA家族成员， 是从黑色素瘤细胞中分离出来的一个大家族抗原基因。近年来，导师所在 课题组一直致力于研究MAGE家族的生物学功能及其作为肿瘤特异性免 疫治疗靶分子的可能性。根据MAGE的表达模式，MAGE家族分为两个亚 类，即MAGE．I类抗原和MAGE—II类抗原。其中MAGE．I类抗原为肿瘤 特异性抗原，在正常体细胞不表达或很少表达；MAGE．II类抗原在正常成 人体细胞中均有表达，因此不属于CTA的范畴。MAGE．I类抗原又分为 万方数据 中文摘要三个亚类，即MAGE．A、MAGE—B和MAGE—C。其中MAGE—A包括12个 中文摘要 三个亚类，即MAGE．A、MAGE—B和MAGE—C。其中MAGE—A包括12个 成员，即MAGE。A1-、一MAGE．A12。目前关于MAGE—A亚型基因在食管 癌中的表达和调节及其在食管癌细胞中生物学功能的研究还很少。因此本 研究首先采用了PCR及酶切的方法研究了MAGE—A亚型在5种食管鳞 状细胞癌细胞系的基因表达谱，探讨了MAGE．A亚型在食管癌细胞中表 达的特点和模式；通过去甲基化试剂地西他滨的作用，测定食管癌肿瘤细 胞的活性、细胞迁移能力、细胞侵袭能力、细胞周期变化，及侵袭相关蛋 白和信号通路蛋白的表达变化，研究了地西他滨对食管癌肿瘤细胞 MAGE—A表达谱的调节作用，及其对肿瘤细胞增殖和侵袭能力的影响； 利用siRNA技术沉默Ecal09和KYSEl70细胞中的MAGE。A基因，研究 了MAGE．A