凉膈散经胆碱能信号通路拮抗lps致raw264.7细胞损伤机上制研究.docxVIP

硕士学位论文 硕士学位论文 法检测细胞炎症因子IL．6和TNF．u的表达。 3．蛋白印迹法检测凉膈散对NF．vd3信号通路的影响 采用蛋白印迹法(Westem blotting)检测非毒剂量凉膈散(25，50，100， 200，400 rtg／m1)对LPS(1 gg／mL)刺激RAW 264．7细胞所致NF-v,B信号通路 关键蛋白Ir,Bn的降解及其磷酸化的影响；采用荧光共聚焦显微镜观察NF-vd3 p65 在细胞中的表达，Western blotting和凝胶迁移电泳(EMSA)法检测凉膈散(400 gg／m1)对LPS诱导RAW264．7细胞NF．vd3 p65入核的影响。 4．胆碱能抗炎通路关键蛋白a7nAchR受到抑制后凉膈散对炎症因子及NF-v,B 信号通路的影响 运用a7nAchR特异性siRNA和特异性抑制剂甲基牛扁碱(methyllycaconitine， MLA)作用RAW264．7细胞后，采用Western Blotting检测非毒剂量下不同浓度 的凉膈散(25，50，100，200，400 gg／m1)对LPS刺激RAW 264．7细胞所致炎 症中，胆碱能抗炎通路关键蛋白a7nAchR表达水平的变化。用Lipofectamine 3000 转染siRNAa7nAchR使et7nAchR蛋白基因沉默或用a7 nAchR特异性抑制剂甲 基牛扁碱预处理细胞2小