高放液相色谱法.docVIP

第五章 高效液相色谱法 一、概论 以液体作流动相，液体或固体作固定相的分离分析技术称为液相色谱法。最早的液相色谱法是用菊根粉的吸附柱来分离植物的提取物，用石油醚淋洗，植物提取物中的成分以不同速度向下移动，分离成许多颜色带排列在柱上，这些黄色、绿色的色柱称为色层谱。后来，不仅用于有色物质，也可用于分离无色物质，这种借助于移动速度不同而达到分离和鉴定的技术随着生产和研究的需要不断地发展。 经典的柱色谱法是用碳酸钙或氯化铝等吸附剂填充于玻璃柱管内，吸附剂粒径大于l00μm，柱的装填不紧密，不均匀，分离效率不高，每根柱只能使用1次；流动相由柱管上端依靠重力向下流过柱子，分离速度慢；各组分依次被淋洗下来，收集分离后的组分，再进行测定，效率很低，分析速度很慢。40年代出现了薄层色谱法，操作方便，分析速度加快，但重复性差，难以进行定量测定。直到60年代初吉丁斯(J.C.Giddings)将气相色谱理论修正后用于液相色谱，为其现代化奠定了理论基础。以后在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快，分离效率高和操作自动化；这种色谱技术称为高效液相色谱法。和经典柱色谱法相比，具有以下特点： 1．高压 流动相经色谱柱时，受到的阻力较大，为了使流动相能迅速地通过色谱柱，必须施加高压。一般可达150一300 kg／cm2。 2．高速 使用无脉动的高