MCU、ICU1在大鼠脑梗死模型中的作用及机制.docxVIP

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MCU、ICU1在大鼠脑梗死模型中的作用及机制

河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果,其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文,第一署名为单位河北医科大学,试 验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。 否则,承担相应法律责任。 ■. 1 研究生签名:磁叶导师签章:易互菇—c级学院领专莓章:’羹·。.≮.j』 ≯7j.7笨3 j习.);!妇。 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, I 新擗痧∥ 文责自负。 研究生签名: 弦砷 劲岁年弓月≥驴日 万方数据 目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 4 英文缩写 8 研究论文MCU、MICUl在大鼠脑梗死模型中的作用及机制 前言日U舌 9 材料与方法 1 0 结果 1 8 附图 20 讨论 28 结论 3 O 参考文献 3 1 综述 线粒体钙离子单向转运体的研究进展 34 致谢 45 个人简历 一 .46 万方数据 中文摘要MCU、 中文摘要 MCU、 CUl在大鼠脑梗死模型中的作用及机制 摘 要 目的: 脑梗死是神经内科常见病、多发病,病死率及致残率很高。早期溶栓 是急性脑梗死有效的治疗方法,但是溶栓治疗严格的时间窗使绝大多数患 者很难在规定的时间内到医院接受治疗。脑梗死后神经损伤的病理生理机 制是比较复杂的级联反应,主要包括兴奋性氨基酸毒性、氧化应激、炎症 和凋亡等。缺氧时,谷氨酸兴奋毒作用的关键病理过程之一是钙离子内流 引起钙超载。钙超载导致一系列钙依赖性酶被激活,致使自由基产生增加。 从而引起线粒体受损、脂质过氧化、ATP匮乏、ROS产生、核酸断裂等, 最终导致神经元死亡。线粒体钙浓度与线粒体能量代谢、膜通透性密切相 关,也会对胞浆钙信号进行修饰进而影响细胞功能。线粒体钙离子单向转 运体(Mitochondrial calcium uniporter,MCU)是新近鉴定出的线粒体内 膜上参与线粒体钙摄取的重要结构。MICUl(Mitochondrial calcium uptake 1)是MCU的调节蛋白,其对MCU的作用是激活还是抑制,尚且存在争 议。由此看来,这种高度复杂而精确的调节作用仍有待深入研究。新近研 究表明MCU参与神经细胞谷氨酸兴奋毒,抑制MCU可减少线粒体钙摄 取,保护线粒体功能从而减少神经元死亡。因此我们思考MCU、MICUl 与脑梗死的相关性,能否通过干预MICUl与MCU的表达来扼制钙超载 从而挽救脑梗死中受损细胞?这一新的思路研究期望提供一个脑梗死治 疗的新靶点。 方法: 1采用成年健康雄性Sprague.Dawley大鼠,随机分为正常对照组 (contr01)、假手术组(sham)、大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)组(分为3h、6h、12h、24h、48h、72h六个时间点), 应用Longa等的线栓法建立MCAO大鼠模型。术后麻醉清醒后对大鼠 进行神经功能评分。在上述不同时间点将动物断头处死,用2%2,3,5.三 苯基四唑氮红(triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色法测算脑梗死体 积, 用蛋白质印迹法(Western Blot)、实时定量荧光聚合酶链式反应 万方数据 中文摘要(Real-time 中文摘要 (Real-time reverse transcription-quantitative Polymerase Chain Reaction, RT.qPCR)和免疫组化来观察MCU、MICUl、cleaved.caspase3的表达情 况,用透射电镜观察细胞及线粒体超微结构变化,用流式细胞分析技术检 测线粒体功能。 2采用成年健康雄性Sprague.Dawley大鼠,随机分为正常对照组 (contr01)、假手术组(sham)、MCAO 12h组、尤瑞克林+MCAO组(尤 瑞克林0.00875PAN/kg+MCAO)。给药组动物梗死后尾静脉注射尤瑞克 林0.00875PAN/kg,正常对照组、假手术组和MCAO组给予等容量生理 盐水。术后麻醉清醒后对大鼠进行神经功能评分。梗死后12h大鼠断头处 死,TTC染色法测算脑梗死体积,用Western Blot来观察MCU及凋亡蛋 白cleaved.caspase3的表达情况。 结果: l MCAO组各个时间点可见左侧肢体偏瘫症状,神经功能

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