H9N2亚型猪流感病毒血凝素基因的表达及LAT诊断方法的研.PDFVIP

中国兽医学报 年 月 第 卷 第 期 ５４８ ２０１２ ４ ３２ ４ ＣｈｉｎＪＶｅｔＳｃｉ Ａ ｒ．２０１２ Ｖｏｌ．３２ Ｎｏ．４ 　 　 　 　 　 　　 　 　 ｐ 　 　 　 Ｈ９Ｎ２亚型猪流感病毒血凝素基因的表达及ＬＡＴ诊断方法的研究 １ １ １ ２ ２ ， ， ， ， （ ， ； 张瑞华 李春红 薛拥志 金梅林 陈焕春 河北北方学院动物科技学院 河北张家口 １． ０７５１３１ 　 ， ） 华中农业大学动物医学院动物病毒室 湖北武汉 ２． ４３００７０ ： ， 摘要 根据 Ｈ９Ｎ２亚型猪流感病毒血凝素基因序列设计并合成引物 从本室分离保存的 Ｈ９Ｎ２亚型猪流感病毒中 扩增出血凝素基因， ， ， 并将其克隆进 ＭＤ１８ Ｔ载体 限制性酶切及序列测定后 进一步将其信号肽缺失并亚克隆到 ｐ － ， （ ） 。 ＧＥＸ ＫＧ 中 使其在Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１ ＤＥ３ 中与ＧＳＴ 融合表达 ＳＤＳＰＡＧＥ显示表达的融合蛋白的相对分子质量约 ｐ － 　 － 为 。 。 ， 、 ， ９００００ Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹表明表达的蛋白质具有免疫学活性 表达产物位于包涵体中 包涵体经变性 复性处理 　 ， （ ） ， 利用复性产物作为抗原 经碳二亚胺 ＥＤＡＣ 将表达产物和羧基化的乳胶共价偶联 建立了 Ｈ９亚型猪流感病毒抗 ， ， 、 、 体的乳胶凝集试验的检测方法 结果表明 应用 ＨＡ 重组蛋白作为诊断抗原具有特异性强 敏感性高 重复性好的 特点， 、 。 可用于 Ｈ９亚型猪流感抗体水平监测 流行病学调查和现地疫病普查 ： ； ； ； 关键词 猪流感病毒 血凝素基因 原核表达 乳胶凝集试验 中图分类号： 文献标志码： 文章编号： （ ） Ｓ８５２．６５ Ａ １００５４５４５２０１２０４０５４８０４ 　　　 　　　 － － － （ ） Ｅｘ ｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｅｍａ ｌｕｔｉｎｉｎｏｆｓｗｉｎｅｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ ＳＩＶ ａｎｄｔｈｅｄｅｖｅｌｏ ｍｅｎｔ ｐ