T淋巴细胞功上能测定.pptVIP

 T淋巴细胞功能测定;实 验 流 程;实验内容;教学要求;淋巴细胞转化试验 (Lymphocyte transformation test);实验分组及材料;免疫血清分离过程;实验步骤;细胞计数板;细胞培养： 按图所示加板。 将板做好标记，在倒置显微镜下观察细胞，然后放于37℃ 5%C02培养箱中，培养48小时。 MTT掺入：（隔一天 下午2:00） 在终止培养前2小时，在显微镜下观察细胞转化情况。 每孔内加入MTT（5mg/ml) 10μl，加完后轻轻搕板，使MTT和细胞混匀。 在37℃ 5%C02培养箱中继续培养2小时，然后离心2000rpm，5min，轻轻弃去上清，（注意不要将孔底部的颗粒物弃出）。 加入100μl 二甲亚砜（DMSO)，将颗粒溶解。 （隔一天 下午4:00） 结果测定： 结果测量：用酶标仪测定光密度值：A570nm（用空白孔调零），记录结果。 结果判定： SI（刺激指数）=Con A刺激孔 A值 / 对照孔A值;预习内容;八个人一块培养板，两人加脾，两人加胸??? 每孔加入100 μl调好的细胞悬液 1-3孔加入10%FCS-IMDM 培养液， 100 μl 4-6孔加入2.5 μg/ml的Con A, 100 μl 7-9孔加入5 μg/ml的Con A, 100 μl 10-12孔加入10 μg/ml的Con