一株来自海洋淤泥的铜绿假单胞菌株des-3的鉴定及基因ap02对其产碱性信蛋白酶的影响研究.docxVIP

号为WP_044156525．1)的peptidase基因一致性为100％，该序列来自全基因组测序的功能注释，暂无其他生化特性研究。 号为WP_044156525．1)的peptidase基因一致性为100％，该序列来自全基 因组测序的功能注释，暂无其他生化特性研究。 扩增基因ap02与表达载体pET-32a(+)连接转化至Escherichia coli BL2 1(DE3)pLysS表达宿主中，构建重组表达载体。测得粗酶最适反应温度 和pH分别为65C和9．0，在4-45。C和pH 7．0—9．0范围内有很高的热稳定性 和pH耐受性。Ca2+、Mn2+对酶活有明显激活作用，Fe2+、Cu2+、Ba2+、Zn2+ 对酶活有明显的抑制作用。PMSF和EDTA对酶活力有强烈抑制作用，推 测该酶属于丝氨酸蛋白酶类，且有一定的金属依赖性。 将基因ap02与广宿主表达载体pMP2444和pBBRlMCS一5连接，转化 至以O．3 M蔗糖溶液为电转化介质的Pseudomonas aeruginosa sp．DES一3感 受态细胞中，构建基因工程菌株。研究发现在同一温度下，两个基因工程 菌株的酶活力均比野生菌株DES．3的酶活力稍低，但基因工程菌株 DES．3／pBBRlMCS．5一ap02的最适反应温度为60。C，较野生菌株的提高了 5℃。 本研究打破常规对菌株改造的方法，尝试将外源蛋白