溶藻菌与絮凝技行术处理铜绿微囊藻的研究-微生物学专业毕业论文.docx

浙江大学研究生学位论文独创性声昵l哪Y㈣31 浙江大学研究生学位论文独创性声昵l哪Y㈣311 1㈣124 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝塑太堂或其他教育机构的学位或证 书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中 作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：为，彬b 签字日期：。≯，6年 ∥月≯7日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解逝塑太堂有权保留并向国家有关部门或机构 送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝壅太堂可以 将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、 缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名： 船、翻习飞 导师签名： 签字日期：沙／‘年g月7日 签字日期： 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 目录 目录 致谢 ．．I 摘要 I Abstract ． ． ． ． ． ． ． ．．IV 第一章绪论 ．1 1．1铜绿微囊藻及其危害 ．1 1．2蓝藻水华的治理 ．2 1．2．1化学治藻法 2 1．2．2物理治藻法 4 1．2．3生物治藻法 4 1．3本研究的目的与意义 7 第二章不同碳源诱导Citrobacter sp．R1溶藻活性差异原因的探索 8 2．1实验材料 8 2．1．1目标藻种与溶藻菌 8 2．1．2培养基 8 2．1．3主要试剂 9 2．1．4主要仪器设备 9 2．1．5主要引物序列 ．．10 2．2实验方法 11 2．2．1两种不同碳源培养下Citrobacter sp．R1的溶藻特性 ．11 2．2．2叶绿素a的提取及溶藻率计算 1 1 2．2．3溶藻突变株的构建 ．．1 1 2．2．4突变株(TRl)的验证 12 2．2．5溶藻基因的获取 12 2．2．6 TA克隆与转化 ．13 2．2．7 Real—time PCR法检测两种不同碳源培养下glgA基因相对表达量14 2．2．8 SDS．PAGE凝胶电泳 15 2．3实验结果 16 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 目录 2．3．1两种不同碳源培养下Citrobacter sp．R1的溶藻特性差异 ．．16 2．3．2两种不同碳源诱导细菌R1溶藻率差异原因的探索 1 7 2．4分析与讨论 23 第三章麸皮提高Alcaligenes aquatilis F8对铜绿微囊藻细胞毒性的研究 24 3．1实验材料 ．24 3．1．1目标藻种和溶藻菌 ．．24 3．1．2培养基 ．．24 3．1．3主要试剂 ．．24 3．1．4主要仪器设备 ．．24 3．1．5主要引物序列 ．．24 3．2实验方法 24 3．2．1溶藻菌的培养、分离与鉴定 ．．24 3．2．2细菌F8的固定化与去固定化 26 3．2．3溶藻活性的测定 ．．26 3．2．4麸皮中提高细菌F8溶藻活性的关键成分的推测 27 3．2．5麸皮中提高细菌F8溶藻活性的关键成分的验证 27 3．2．6统计分析 ．．28 3．3实验结果 ．28 3．3．1细菌F8的筛选与鉴定 28 3．3．2细菌F8的溶藻特性 29 3．3．3麸皮提高固定化F8的溶藻活性 30 3．3．4麸皮提高固定化F8溶藻活性机理的研究 32 3．4分析与讨论 36 第四章磁性纳米颗粒联合麸皮提高固定化Bacillus methylotrophicus ZJU对铜绿 微囊藻细胞毒性的研究 38 4．1实验材料 ．38 4．1．1目标藻种和溶藻菌 ．．38 4．1．2培养基 ．．38 4．1．3主要试剂 ．．38 II 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 目录 4．1．4主要仪器设备 ．．38 4．1．5主要引物序列 ．．38 4．2实验方法 38 4．2．1溶藻菌的培养、分离与鉴定 ．．38 4．2．2 Fe304纳米颗粒的制备 39 4．2．3细菌ZJU的固定化及使用Fe304和麸皮改善细菌溶藻活性 39 4．2．4 Fe304和Fe304。coated固定化ZJU的磁性及其回收潜能的测定 39 4．2．5溶藻实验 ．．40 4．2．6细菌ZJU对铜绿微囊藻的氧化损伤以及藻细胞的抗氧化应答 ．40 4．2．7荧光染色及流式细胞仪分析 ．．41 4．2．8统计分析 ．．42 4．3实验结果 ．42 4．3．1细菌ZJU的鉴定 ．42 4．3．2游离以及固定化的细菌ZJU的溶藻活性 ．43 4．3．3固定化细菌ZJU溶藻特性的改良 ．4