Dicer及其miRNAs是血管平滑肌细胞分化和增殖所必需的基因和调节.PDFVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2014, 4 1(12): 1255~ 1264 Dicer 及其miRNAs 是血管平滑肌细胞分化 和增殖所必需的基因和调节因子* 潘耀谦1, 2)**, *** 潘博2)** 刘兴友1, 2) 李瑞珍1, 2) 岳军明3) 1) 2) ( 河南科技学院动物科学学院，新乡453003 ； 南省高校工程技术研究中心，新乡453003； 3) Dep artment of Phys iology, Univ ers ity of Tennessee Health Sc ience Center, Memp his, TN 38163, USA) 摘要 为了研究Dicer 及其所产生的miRNAs 在血管平滑肌细胞(VSMC) 中的作用，本研究采用条件性基因打靶法敲除了小 鼠VSMC 中的Dicer 外显子23 ，通过采用连续性剖检妊娠小鼠法、病理组织学、免疫荧光、PCR、Western blot 和实时PCR 等技术对条件性敲除Dicer(Dicer cKO)胚胎的血管病变和VSMC 中的Dicer、miRNAs 和信号转导通路蛋白变化进行了详细研 究 结果发 ，在培育条件性敲除Dicer 小鼠的过程可产生三种不同基因型小鼠，即野生型、杂合型和纯合型(Dicer cKO)小 鼠 其中野生型和杂合型小鼠出生后无明显临床异常，而Dicer cKO 小鼠却死于腹中而不能出生 Dicer cKO 胚胎在胚胎发 育的第 12.5 天(E 12.5)就出 发育迟滞变化，在E 14.5，皮肤、骨骼肌和肝脏的血管极度扩张、血液淤滞和广泛的弥漫性出 血，在E 15.5 死亡 Dicer cKO 胚胎血管壁的病变于E 13.5 即出 ，主要表 为血管中膜的VSMC 排列不整，增生减少； E14.5 血管壁变薄、塌陷，管腔不规则，细胞增生明显减少；E 15.5 血管壁的结构完全破坏，细胞增生停止，血管壁的屏障 作用破坏，通透性增强，向外渗血 在胚胎发育的E 14.5，VSMC 标志性基因的表达明显下调，VSMC 中大部分受检 miRNAs 的表达也明显降低，磷酸化的信号转导通路蛋白，即细胞外信号调节激 和蛋白激 明显衰减 研究证明，Dicer 是血管发育所必需的基因，它可通过控制miRNA 产生和成熟来调节VSMC 标志性基因的表达，借以促进VSMC 的增殖与 分化，保障血管壁结构的完整 关键词 Dicer，微小RNA，血管平滑肌细胞，条件性敲除，胚胎 学科分类号 Q7 ，R36，S85 DOI: 10.3724/SP.J.1206.20 14.00115 血管平滑肌细胞(VSMC)是大中血管的重要组 凋亡和分化 因此，Dicer 通过产生功能性miRNA 成部分，在保障血管壁的结构完整和舒缩能力、维 对生命活动发挥着双重调节作用 miRNA 不仅在 持和调节全身性血液循环，特别是保证生命活动的 发育方面，而且在人类的许多疾病，如病毒病、癌 重要器官———心脏和大脑的血液供应方面起着重要 症和心脑血管疾病等方面也起着重要的作用 [1-4] [9-12] 作用 据大量研究报道 ，心脑血管系统的疾病 大量研究表明 ，Dicer 及其所生成的 目前依然是引起人类死亡的最主要疾病 这与 miRNA 在细胞的增殖、凋亡和分化过程中起着重 VSMC 的异常增生和退变有着密切的关系 近年来 要的作用，但其对血管及其平滑肌的影响还不清 [5-6] 一些研究表明 ，Dicer 及其产生的微小 RNA 楚，报道较少 为了深入研究Dicer 基因及其所生 (miRNAs)在维持血管平滑肌的结构与功能方面起 成的miRNAs 对VSMC 的影响，本研究采用条件 着关键性作用 众所