实验十二 水中细菌总数和大肠杆菌检测.pptVIP

一 实验目的 1、掌握细菌总数的测定方法 2、掌握大肠杆菌的鉴定和计数方法 3、巩固无菌操作技术 2 大肠杆菌鉴定原理 大肠菌群：一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否染肠道致病菌的可能。 样品中大肠菌群系以100mL（g）检样内大肠菌群最大可能数（MPN)表示。 三、实验器材 1、恒温培养箱（36℃±1℃ ）、恒温水浴锅（46℃±1℃ ） 、天平、灭菌培养皿、试管。 2、培养基及试剂： 乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂平板（EMB）、牛肉膏蛋白胨培养基 1、检样稀释 ①以无菌操作将检样1mL放于含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。 ②用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，注入含有9mL生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1：100的稀释液。 ③另取1ml灭菌吸管，按上述操作依次作10倍递增稀释液。 ④根据食品卫生要求或对检验样品污染情况估计，选择三个稀释度，每个稀释度，接种3管，每支试管接种1ml。 2. 乳糖发酵试验 将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管；1mL及1mL以下者，用单料乳糖发酵管。每一个稀释度接种3管，置36℃±1℃温箱内，培养24h±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产生者，则按下列程续进行。 3.分离培养 将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36℃±1℃温箱内，培养18h—24h，然后取出，观察菌落形态并做革兰氏染色和证实试验。 4.证实试验 在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1—2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36℃±1℃的温箱内培养24h±2h，观察产气情况。 凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，即报告为大肠菌群阳性。 5.报告 根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL（g）食品中大肠菌群的MPN 值。 五、实验报告 （一）、列表记录并计算实验结果 （二）、思考题 1、怎样判断分离到的微生物是大肠杆菌？ 2、接种了微生物的培养皿为什么要倒置培养？ 实验准备（2个样品） 培养皿：10套/组 无菌水：10支（9毫升/支） 乳糖胆盐发酵培养基：18支试管、5ml/支 100ml 伊红美蓝琼脂培养基（EMB）:100ml，4个平板 牛肉膏蛋白胨培养基:150ml，6个平板 * * * * * * * 实验十二 水中细菌 总数与大肠菌群的测定 1.细菌总数测定原理 用营养琼脂倾注平板，测定被检物在单位重量或体积（g或ml）内所含有的活细菌数量，以判明被检物被细菌污染的程度。 二 实验原理 细 菌 学 检 验 程 序 样品 细菌总数 大肠菌群 水样稀释或不稀释 水样稀释或不稀释 第一步------ 初步发酵试验 倾注平板培养 （乳糖发酵） 37 ℃ 24小时 37℃ 24小时 菌落计数 第二步------ 平板分离培养 （取平均数报告） （转种鉴别培养基） 37℃ 24小时