侵袭性真菌感染的实验诊断-2011.ppt

侵袭性真菌感染的实验室诊断 十堰市太和医院检验部 湖北医药学院检验系 杨宏伟 真菌感染的实验诊断方法及问题 形态学检查：经验？阳性率？ 培养+鉴定：时间长，敏感性？ 血清学检查：敏感性？特异性？ 分子生物学检查：标准化？ 侵袭性真菌病的致病菌 条件致病菌 念珠菌 曲霉 隐球菌 接合菌 镰刀菌 暗色真菌 酵母菌 毛孢子菌 枝顶孢霉 致病性双相真菌 组织胞浆菌 球孢子菌 芽生菌 马内菲青霉 孢子丝菌 念珠菌病 隐球菌病 侵袭性曲霉病 （1-3） - β- D-葡聚糖检测 （1-3）-β-D-葡聚糖检测 真菌细胞壁成份，占50%以上 其他微生物、动物及人的细胞不含该成份 用于侵袭性真菌 感染的早期诊断 方法：G试验 β-葡聚糖可特异性激活鲎（Limulus）变形细胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故称G试验。 Beta-D-glucan 通过激活G因子（ Factor G）引起凝集 BG检测的特点 可检测多种致病真菌感染 念珠菌,曲霉,肺孢子菌,镰刀菌,地霉,组织胞浆菌,毛孢子菌等 不能用于检测隐球菌和接合菌感染 阳性结果代表存在侵袭性真菌感染 真菌对数生长期释放量最大 ,可被体内葡聚糖酶降解(glucanase) 每周检测2次 BG检测用于念珠菌血症 敏感度为62%-100%，特异度为64%-88% 不同种念珠菌感染对葡聚糖检测无明显影响 白念珠菌,光滑念珠菌, 热带念珠菌,克柔念珠菌,季也蒙念珠菌和葡萄牙念珠菌 近平滑念珠菌BG水平较低 BG检测用于念珠菌血症 BG检测敏感度明显高于Mannan检测 79.6%vs42% 阳性早于血培养阳性和临床症状出现 对于念珠菌血症, BG检测是首选检查 BG检测用于侵袭性肺曲霉感染（IPA) 敏感度为55%-100% 特异度为52%-100% 对于确诊IPA，阳性率为85.7-100% 高度可疑IPA，阳性率为52.4-66% BG检测用于肺孢子菌检测 BG是肺孢子菌包囊壁的组成成分 可释放入血液 可用于肺孢子菌检测 目前常用的试剂 Fungitec-G (Japan) 界值为20pg/mL Fungitell(US) 界值为60pg/ mL或80pg/mL GKT-5M Set动态真菌检测试剂盒 (金山川公司) 界值为20pg/mL 或50pg/mL （4）多串连PCR（multiplex tandem PCR，MT-PCR）以ITS1、ITS2、EF1-α、β微管蛋白（β-tubulin）为靶基因，可测常见念珠菌、隐球菌、曲霉、镰刀菌、接合菌等。 （5）反向线点杂交（reverse line blot hybridization，RLB）和基因芯片（oligonucleotide microarray）技术。尚未获批准。 半乳甘露聚糖抗原检测（GM试验） 曲霉半乳甘露聚糖抗原 GM 抗原 乳胶凝集试验（Pastorex?） (15 ng/ml) 酶连免疫吸附试验（Platelia?） (1 ng/ml) GM抗原检测原理 曲霉galactomannan antigen 大鼠EBA-2单克隆抗体 双抗夹心法 GM试验 敏感度为0.71，特异度为0.89 血液系统恶性病，敏感度和特异度分别为0.7和0.92 骨髓移植患者，敏感度和特异度分别为0.82和0.86 实体器官移植患者，敏感度为0.22，特异度为0.84 成人敏感度和特异度分别为0.62和0.87 儿童敏感度和特异度分别为0.89和0.85 ,文章较少（仅有2篇），但是呈现出较高的敏感度和特异度。 假阳性 哌拉西林/他唑巴坦 Gluconate 与其它的细菌或真菌成分有交叉反应 皮炎芽生菌、黑孢霉、拟青霉、产黄青霉、马尔尼菲青霉、粉红单端孢、头状地霉等 肠道中定植的曲霉释放GM进入血液循环 谷类食物中的GM抗原 曲霉感染检测的影响因素 半乳甘露聚糖在血中存在时间短，建议： 高危人群每周至少检测2次 结合影象学、培养结果综合分析诊断 结果判定标准 界值的确定 抗真菌治疗情况 GM试验 试剂盒推荐界值为1.5时 灵敏度为64.7%, 特异度为93.5% 连续2次1.5为阳性 灵敏度为63.6%，特异度为85.7% GM试验 对于46例造血干细胞移植后患者的167份血样进行GM抗原的测定，发现以单次测定大于1.0，或者连续2次大于0.8为阳性标准，试验的灵敏度和特异度均较高，根据上述界值，该试验的灵敏度为81.8%，特异度为93.3%。 GM界值 FDA将界值定为0.5 界值从1.5降到0.5 敏感度从76.3%升到97.4%----- 21% 特异度从97.5%降到90.5%----