琥珀酸脱氢酶（SDH）测试盒.PDFVIP

琥珀酸脱氢酶 （SDH）测试盒 说明书修订日期：2016.04.08 Cat number：KGT034 Store at -20℃for 3 months For Research Use Only （科研专用） 一、测定原理： 琥珀酸脱氢酶 （SDH）催化底物反应，FAD 是该反应的辅基，FAD 被还原成 FADH，该反应与 2，6- DPIP的还原相欧联，测定 2，6-DPIP 的还原速度可以推算出 SDH 的活力。 二、试剂组成与配制： 组份 KGT034 （48 T） 保存条件 试剂一 60ml*2 4℃ 试剂二 6ml 4℃避光 试剂三 6ml 4℃避光 试剂四 6ml*2 4℃避光 试剂五* 6ml -20℃避光 试剂六 6ml 4℃ *试剂五需冷藏，如需多次使用，建议老师将试剂五分装后冷冻保存，避免反复冻融。 工作液配制： （按一下比例配制） 试剂一 （ml） 2 试剂二 （ml） 0.1 试剂三 （ml） 0.1 试剂四 （ml） 0.2 试剂五 （ml） 0.1 试剂六 （ml） 0.1 用多少配多少，现用现配，配好后避光保存。 三、规范操作步骤： 1.将可见分光光度计于 600nm 处，1cm 光径比色皿，蒸馏水调零 （比色皿准备两只，一只用于调零，一只 用于测定）。 2.将工作液，37℃预温5分钟以上。 3.往相应相应编号的试管中加入0.1ml 待测样本， 用 5ml 大加样器吸取已预温好2.6ml的工作液快速冲 入试管中，立即混匀并计时。 4.迅速倒入比色皿中在可见分光光度计于600nm 处比色，5 秒时读吸光度值 OD ，比色皿不要拿出，过一1 分钟，即 65 秒时读取 OD 值。记录 △OD 值 OD 值- OD 值以备计算。2 1 2 注意点： 1、 工作液一定要避光保存，测定过程中工作液同样要避光。 2、 比色皿必须用自来水洗干净，再用蒸馏水洗 2-3 次后，才能对下一个样本进行检测。 3、 在比色皿中加完样后，下一步加试剂与按秒表需同步。 4、 在比色皿中加完试剂后，必须快速放入分光光度计的比色槽中。 5、 试剂二、试剂三、试剂四、试剂五必须避光冷藏。 6、 配好的混合试剂在测定前必须预温。 四、定义及计算： （一）、组织中琥珀酸脱氢酶活力的计算： 1、定义：每毫克蛋白每分钟使反应体系的吸光度降低 0.01 为 1 个比活性单位。 2、计算公式： OD  0.01  [取样量 （0.1ml）×待测样本蛋白浓度 U / mgprot mgprot/ml SDH活力 （ ） 反应时间 （1分钟） （ ）] 3、计算举例： a、取 10%鸡肝组织匀浆按操作步骤进行琥珀酸脱氢酶活力测定，测得 5 秒时吸光度 OD 1 值为 0.549，65 秒时吸光度 OD 值为 0.470，同时测得该组织匀浆的蛋白含量为2 9.4mg/ml。则计算如下： OD  0.01  [取样量 （0.1ml）×待测样本蛋白浓度 酶的比活性 （U