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兽医微生物学实习 肠杆菌科 实习报告书写格式 进入教务处网站 →“热点工作” →“常用表格下载” →左下角“实习教学资料” →“14 南京农业大学实习报告统一格式” 一、目的要求 1 ．了解大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）形态与染色特性以及主要培养特性； 2 ．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）常规微生物学诊断法； 3 ．掌握大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）生化试验的方法和原理； 4 ．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）在选择性和鉴别培养基上的生长表现； 二、实验材料 1.菌种：大肠杆菌和沙门氏菌混合液 产气肠杆菌和变形杆菌混合液 2.培养基：半固体培养基 S·S平板 麦康凯平板 三糖铁高层斜面 蛋白胨水 葡萄糖蛋白胨水 3. 生化管：葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、 甘露醇、卫矛醇、枸橼酸盐、H2S、尿素 4. 生化试剂：吲哚试剂， M. R 、 V . P 试剂 三、内容与安排 一、 配培养基：S.S、麦康凯、半固体、三糖铁高层斜面、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水 二、 细菌分离培养： 将大肠杆菌、沙门氏菌混合肉汤，产气、变形混合肉汤分别接种麦康凯、S·S平板，染色镜检 三、 挑取麦康凯和S·S平板上单一菌落做染色、镜检，挑单一菌落接种三糖铁斜面(涂布、穿刺) 四、观察三糖铁中细菌生长情况。并挑取三糖铁斜面上的细菌分别接种蛋胨水、葡胨水、半固体、微量生化管，37℃培养48h。 五、 观察结果 第一天、 配培养基 第一组(1-5号） S.S培养基：50g S·S培养基+800ml蒸馏水，煮沸溶化浇平板（15ml/块平板），无需高压 第二组（6-10号） 麦康凯培养基： 44g麦康凯培养基+800ml蒸馏水+1.6g琼脂粉，煮沸，高压15磅，15分钟，浇平板 第三组（11-15号） 三糖铁琼脂：30.5g三糖铁琼脂+500ml蒸馏水，煮沸溶化， 装长试管50根（10ml/管）， 高压15磅，15分钟，做高层斜面 第四组（16-20号） 葡萄糖蛋白胨水：1.25g蛋白胨+1.25g葡萄糖+1.25g磷酸氢二钾+250ml水，加热溶解，调pH至7.6，分装40根短试管高压（3指半高，约5-8ml） 第五组（21-25号）蛋白胨水：1.25g蛋白胨+0.625gNaCl+125ml水，调pH至7.6，分装40根短试管，捆扎，高压，121℃15分钟　（2指高，约2-4ml） 第六组（其余学号）半固体： （73班）：分别称取蛋白胨5g、牛肉膏2.5g、氯化钠2.5g、磷酸氢二钾0.5g、蒸馏水500ml，加热溶解，调pH7.6，过滤 （74班）：称琼脂粉2g+肉汤500ml,煮沸，待琼脂粉完全溶化，分装短试管（2指高，约2-4ml） 第二天、 分离培养 在麦康凯平板和S·S平板上接种待检材料（大、沙混合菌液;产气、变形混合菌液） 置37℃恒温培养箱内培养24小时 观察每种平板上细菌的生长情况 比较单个菌落的形态：染色镜检 SS琼脂 强选择性培养基 培养基中的煌绿、胆盐、硫代硫酸钠、柠檬酸钠抑制非肠道 菌生长 不能发酵乳糖的细菌，菌落橘黄色 分解乳糖的细菌产酸，使胆盐呈胆酸析出，形成中心混浊的深红色菌落 柠檬酸铁使产生硫化氢的菌落中心呈黑色 硫代硫酸具有缓和胆盐对细菌的有害作用及煌绿、中性红的毒性作用。 麦康凯培养基 用于肠道菌的分离与鉴定 能分解乳糖的细菌--菌落红色 不能分解乳糖的细菌—菌落灰白色 第三天 观察结果 接种三糖铁 观察麦康凯、S.S平板上细菌生长情况．可看到几种菌落，是否圆形光滑凸起透明的菌落 挑取单个的细小透明菌落或者红色菌落的一半作革兰氏染色，镜检，另一半菌落接种三糖铁培养基（接种时，先涂布斜面，后穿刺底层）、接种蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、半固体 37℃恒温培养24-48h。 三糖铁琼脂 用于测定细菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖的发酵作用及能否产生硫化氢 能发酵乳糖、蔗糖 培养基呈黄色 发酵葡萄糖不发酵乳糖、蔗糖 底层呈黄色、斜面部分为红色(少量酸接触空气而氧化 细菌生长利用含氮物质,生成碱性化合物) 能产生硫化氢 培养基呈黑色 能产气的细菌 底层琼脂内有气泡 第四天 观察结果 做生化试验 观察细菌在三糖铁斜面/底部的生长情况：是否产酸产气，培养基是否变红。 挑取三糖铁斜面上的细菌分别接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、尿素、枸橼酸盐培养基，37℃培养24h，观察结果，记录。 第五天 生化结果判定 1．靛基质试验（吲哚试验） 取出试管（蛋白胨水）→乙醚1ml，振荡，静置，待分层后→沿管壁加入对二甲基氨基苯甲醛3-5滴，在分