色谱概流论1-3章.pptVIP

第二节 高效液相色谱仪 一、高效液相色谱仪的流程 二、现代高效液相色谱仪的性能 ☆ 高效液相色谱系统性能的要求 ： 应用面广；分析速度快；重复性好；灵敏度高。 ☆ 高效液相色谱系统的要求： 可测多种样品；有高选择性；高流动性；自动化； 高灵敏度检测器； ☆ 高效液相色谱设备的要求： ①使用抗化学腐蚀的材料，有各种检测器，各种色谱柱； ②高性能高压泵，进样器，检测器，管线的死体积小，有快速记录和数据处理器的设备； ③可精确控制柱、温度、流动相的组成和流量； ④高信噪比的检测系统。 三、高效液相色谱仪的主要部件 色谱泵 自动进样器 色谱柱及柱温箱 检测器 数据处理系统 溶剂 1. 高压输液泵的一般性能 1）可重复性 是指把泵重新调到某一流量的能力，即从较高或较低流量恢复到某一特定流量的能力。 2）输出液体流量的短周期精密度 是指泵在短时间内（常指几分钟），输出液体体积恒定性的指标。精密度的变差是由于泵的某些故障所引起的。例如，往复泵的单向阀无规则地泄漏所引起的输出液体流量不稳。 3）泵噪音 一些类型的泵，如往复泵，有泵噪音是它所固有的特性，是由活塞的正常运动和单向阀的工作所引起的。 4）漂移（长周期的测量精度） 是指在较长的时间里，泵流量的连续变化的情况，往往是由于室温的变化而引起输出流量的变化。 5）准确度 是指按设定值输出准确流体的能力。 2. 输液泵 1）输液泵应具备的性能： ◇流量精度高且稳定 ◇流量范围宽 ◇能在高压下连续工作 ◇液缸容积小 ◇密封性能好，耐腐蚀 2）输液泵操作注意事项： ◆防止固体微粒进入泵体 ◆流动相不应含有腐蚀性物质 ◆防止溶剂瓶内的流动相被用完 ◆不超过规定的最高压力 ◆流动相一般应该先脱气 四、高效液相色谱仪的检测器 紫外可见分光光度检测器—应用最广的检测器 特点： ①灵敏度高； ②线性范围宽； ③可做成很小池体积的流通； ④对流动相的流速和温度变化不太敏感（灵敏度高时除外）； ⑤易于操作，十分可靠； ⑥不破坏样品； ⑦波长可以选择； ⑧对不同的溶质响应有很大的差别； ⑨可用于梯度洗脱。 2. 示差折光检测器 1)示差折光检测器基本原理 检测基于被分析物的折光指数的差异,测量样品流路与参比流路在折光指数上的差别;当折光指数差异最大时灵敏度也达到最大;并不测量绝对的折光指数而是测定折光指数的差别。 2)示差折光检测器的优、缺点 a、优点：通用检测器；容易使用，通常来说是比较耐用的检测器；维护成本低。 b、缺点：灵敏度低、选择性差；对流速、温度及粘度的变化敏感；不能用于梯度方法；色谱峰可能是正的，也可能是负的。 3. 荧光检测器 荧光检测器是把荧光光度计用于高效液相色谱仪，它是一种灵敏度高、选择性好的检测器。荧光检测器的主要应用范围是生物样品、药物、食品、矿物燃料和环境样品。其特点是： 1）灵敏度高，是高灵敏液相色谱检测器之一； 2）本身可产生荧光的物质，或能用有荧光基团的试剂进行衍生化的物质； 3）对有些物质的动态线性范围较小，一般为10000。 4）如用激光做激发光源可大大提高其灵敏度。 4.二极管阵列检测器 从氚等发出的紫外光通过一个消色差透镜系统，照射在流通池上，经过一个狭缝后光束照在一个全息光栅上，经色散分光后抵达一组光电二极管阵列上，在几毫秒内测定出光谱信息。其特点是： 1）可进行全波长检测，一次进样可以检测到样品中不同吸收波长下的所有组分； 2）光谱分辨率高，可以检测色谱峰的纯度； 3）灵敏度高； 4）线性范围宽； 5）基线的噪音小。 5.蒸发激光光散射检测器 蒸发激光光散射检测器运行的过程是用氮气把流动相吹成细雾状，流动相的液滴通过一个预加热的腔体后被蒸发掉，蒸发的溶剂从检测器中被除去。溶质的挥发性小于流动相，因此产生颗粒束与光束相交，被颗粒散射的光由光电倍增管收集。 蒸发激光光散射检测器的应用领域：碳水化合物、油脂及脂肪酸、未衍生的氨基酸、制药行业、表面活性剂、天然产物。 谢谢！ 色谱分析 概论 第一章 绪论 第二章 色谱法的原理 第三章 色谱仪 第一章 绪论 1 色谱法的发展简史 3 2 色谱法与其他方法的比较和配合 色谱法的定义与分类 色谱法与色谱法与其他方法的比较和配合 其他方法的比较和配合 第一节 色谱法的发展史 一、色谱