色谱分等离-2.pptVIP

2、基线：在实验条件下，色谱柱仅有纯流动相进入检测器时的流出曲线称为基线。 3、峰高：色谱峰顶与基线间的垂直距离，以h表示。? 4、保留值： A 死时间tm：不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间。因为物质不被固定相吸附，故其流动速度将与流动相的流动速度相近： B保留时间tr：试样从进样到柱后出现峰极大点时所经历的时间。 C 调整保留时间tr’： . 保留时间tr的表达： 时间单位(如s, d, h), 距离单位(如cm)， 体积(ml, l)表示。 tr意义： 色谱法定性的基本依据，但同一组份的tr常受到流动相流速的影响，因此色谱工作者有时用保留体积等参数进行定性检定。 D、死体积VM：指色谱柱内固定相颗粒间所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头间的空间以及检测器的空间的总和，当后两项很小而可忽略不计时， VM可由 tm与流动相体积流速F0(ml/min)的乘积计算： E、保留体积VR：指从进样开始到被测组份在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相体积。保留体积与tr的关系如右图： F、调整保留体积V’R：某组份VR扣除VM后，称该组份的V’R ，即 G、相对保留值?2,1：某组份2与组份1的调整保留值之比，即： 由于?2,1只与柱温及固定相的性质有关，而与柱径、柱长、填充情况及流动相流速无关，因此，它是色谱法中，如GC、HPLC中，广泛使用的定性数据。 注意：?2,1绝不是两个组份保留时间或保留体积之比 在定性分析中，通常固定一个色谱峰作为标值(s), 然后再求其它峰(i)对这个峰的相对保留值。此时?r,i 可能大于1，也可能小于1。在多元混合物分析中，通常选择一对最难分离的物质对，将它们的相对保留值作为重要参数。在这种特殊情况下，可用符号a表示： 式中t’r,2为下一峰的调整保留时间，所以这时a总是大于1。 两组份完全分离必须满足： A、两组份的分配系数必须有差异； B、区域扩宽的速率应小于区域分离的速度； C、在保证快速分离的前提下，提供足够长的色谱柱。 （1） 塔板理论 （2） 速率理论-影响柱效的因素 涡流扩散项 分子扩散项 传质阻力项 分离度 分离度的表达式： 影响分离度的因素 谱定性、定量方法 第三节 凝胶过滤色谱 一、 原理与操作 定义： 凝胶过滤 (Gelfitration) 即凝胶过滤层析 (Gelfitration Chromatography)， 也称分子排阻层析 (Molecular-Exclusion)、 尺寸排阻 (Size Exclusion)、 分子筛层析 (Moleculai-Sieve Chromatography) ， 是以各种多孔凝胶为固定相，利用溶液中各组分的分子量不同而进行分离的技术。 GFC是一种纯粹按照溶质分子在流动相溶剂中的体积大小分离的色谱法。填料具有一定范围的孔尺寸，大分子进不去而先流出色谱柱，小分子后流出。 分子筛凝胶色谱原理 GFC操作中溶质的分配系数M只是 相对分子质量、 分子形状、 凝胶结构(孔径分布) 的函数， 与所用洗脱液的pH值和离子强度等物性无关，即在一般的层析操作条件下、相对分子质量一定的溶质的分配系数为常数。 因此，GFC操作一般采用组成一定的洗脱液进行洗脱展开，这种洗脱法称为恒定洗脱法(isocratic elution)。 GFC可分离系统体积介于V0和Vt之间的溶质，分离精度有限，料液处理量也很小，只有当料液体积小于两溶质的洗脱体积差，才有可能完全分离。 （1）凝胶的处理 葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶以干品出售的，所以在使用前必须溶胀。可以将它们浸泡在洗脱剂中，慢慢搅拌。 洗脱剂应具有一定的离子强度（约为0.08）。这是因为大多数凝胶都含有少量羧基，如果洗脱剂的离子强度低于0.08，少量羧基不能被屏蔽，凝胶颗粒就具有离子交换性质，从而改变溶质的分配系数。 凝胶层析的操作 （2）装柱 装柱前，柱的底部要先放些玻璃棉、玻璃细孔板等可拆卸的支持物，以支持固定相。 凝胶要悬浮在洗脱剂中，在搅拌下缓慢加