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色谱分析法第一节 色谱分析法导论 五、色谱流出曲线（色谱图）及有关术语 第二节 色谱分析的理论基础 二、 色谱法基本理论 1. 涡流扩散项－A 2. 分子扩散项—B 3.传质阻力项— C 4. 载气流速与柱效-最佳流速 5. 速率理论的要点 第三节 色谱分离条件的选择 二、分离方程式 第四节 气相色谱法 （二） 定量分析方法 八、毛细管色谱法 六、高效液相色谱实验技术 五、高效液相色谱的应用 二、高效液相色谱仪 高效液相色谱仪由 高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统 等五大部分组成。 1. 储液瓶 2. 高压输液泵 3. 混合器 4. 进样器 5. 色谱柱 6. 检测器 7. 废液瓶 8. 数据处理和 控制系统 液相色谱仪（1） 液相色谱仪（2） 三、梯度洗脱 在分离过程中，使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变比例，从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果，缩短分析时间的目的。 仅用弱溶剂 仅用强溶剂 梯度洗提 ? 紫外光度检测器 光电二极管阵列检测器 荧光检测器 ? 差示折光检测器 电导检测器 化学发光检测器 四、高效液相色谱检测器 五、高效液相色谱主要分离类型 固定相：固体吸附剂，如硅胶、氧化铝等，较常使 用的是5～10μm的硅胶吸附剂。 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 1、液---固吸附色谱 分离原理：物质在固定相上的吸附作用不同。 2、液---液分配色谱 分离原理：根据物质在固定相和流动相上具有不 同的分配系数。 固定相：担体+固定液，固定液起分离作用 化学键合固定相：将固定液通过化学反应键合到硅胶 （担体）表面的游离羟基上。 流动相：一种或多种有机溶剂。 根据流动相 和固定相极性大小不同可分为 正相分配色谱：流动相的极性小于固定相的极 性，适用于极性化合物的分 离。其流出顺序是极性小的先 流出，极性大的后流出。 反相分配色谱：流动相的极性大于固定相的极 性，适用于非极性化合物的 分离，其流出顺序与正相色谱 恰好相反。 3、离子交换色谱 分离原理：利用离子交换原理, 通过不同待测离子 对固定相离子交换能力的差别来实现 分离。凡在溶液中能够电离的物质，通 常都可用离子交换色谱法进行分离。 固定相：阴离子交换树脂或阳离子交换树脂。 流动相： 一定pH和盐度（或离子强度）的缓冲溶液。 通过改变流动相中盐离子的种类、浓度和pH 值可改变选择性。 4、离子对色谱 将一种（或数种）与溶质离子电荷相反的离子加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成离子对，从而控制溶质离子保留行为的一种色谱法。 A +水相 + B – 水相 = A+B- 有机相 它是分离分析强极性有机酸和有机碱的极好方法。 分离原理： 流动相：加有平衡离子（反离子）的极性 溶液，通过改变流动相的pH、平 衡离子的浓度和种类可改变分离 的选择性。 固定相：非极性的疏水键合相 5、空间排阻色谱 基于试样分子的尺寸不同来实现分离的，主要用于较大分子的分离。 分离原理： 固定相：凝胶，一种经过交联而具有立体网状结构的 多聚体 流动相：能溶解样品，粘度低，与检测器相匹配 的溶剂。 6、亲和色谱 分离原理：利用生物大分子和固定相表面 存在某种特异性亲和力，进行 选择性分离。 （二）速率理论——范弟姆特方程式 速率理论是在塔板理论的基础上，给出了 影响塔板高度的因素： u 为流动相线速度； A，B，C 为常数，其中 A — 涡流扩散系数； B — 分子扩散系数； C — 传质阻力系数（包括液相和固相传质阻力系数）。 A = 2λdp