2018年蛋白质复性的条件及影响因素_cropped.docVIP

蛋白质复性的条件及影响因素_cropped 　　摘要 蛋白质复性是一个过程 ,存在中间阶段 ,此阶段的各种相互作用力决定了蛋白质能否复性 。蛋白质复 　　性要求有一定的条件 ,如 p H、温度 、离子强度 、蛋白质浓度等 。另外多种添加剂能促进蛋白质复性 ,其中包括表面 　　活性剂 、低浓度变性剂 、分子伴侣蛋白和各种氧化还原对 ,但对于不同蛋白质 ,因其结构及理化特性不同 ,采取不同 　　复性方法 ,可以使其达到最佳复性效果 。 　　关键词 蛋白质 ; 结构与复性 　　蛋白质是一种具有复杂的空间立体结构的大分,某些脯氨酸异构酶在含有脯氨酸的变性蛋白结构 　　质中被证明对复性有辅助作用 。来源于不同物种中子物质 ,易受外界条件的影响发生变性 。随着基因 　　的同一蛋白质在氨基酸排列顺序上会存在不同程度工程技术的发展 ,许多实验通过将目的蛋白基因转 入原核或真核表达体系进行表达的方法 ,得到需要 的差 异 , 但 其 折 叠 方 式 却 有 很 大 的 保 守 性 。Wal2 　　3 的蛋白质 ,这大大丰富了蛋白质的来源 。但这些蛋 lace 研究了来源于大肠杆菌 、人和乳酸杆菌的二氢 白质 ,由于表达体 系 本 身 的 原 因 , 或 实 验 过 程 的 处 叶酸还原酶的复性 ,虽然这 3 种蛋白在氨基酸顺序 理 ,多以无活性的形式存在 ,需要进行复性 。因此 , 上只有 30 %相同 ,但是却具有相同的复性途径和两 对蛋白质复性的研究必然的成为从基础的实验室生 个中间体 。蛋白质的空间结构由一系列化学键来维 物工程研究到最终临床应用过 程 中 不 可 避 免 的 一 系 ,其中二硫键是维系蛋白质结构完整的重要共价 步 。本文将目前国内外对各种蛋白质复性方面的研 键 ,二硫键的打开或错误搭配会引起蛋白质高级结 究作一综述 。 构的丧失 ,恢复二硫键结构是蛋白质复性的重要一 　　步 。在蛋白质的复性过程中 ,存在一系列的结构相 1 蛋白质的结构与复性 ,这些中间体分子表面有许多疏水基团似的中间体 　　蛋白质在一定的氨基酸顺序的基础上形成非常 暴露 ,对聚集较敏感 ,易于形成沉淀 。同时 ,分子内 复杂的空间立体结构 ,其组成中的氨基酸本身的特 部氨基酸之间存在使蛋白质正 确 折 叠 的 天 然 作 用 性是蛋白质高级结构形成的决定因素和结构基础 , 力 ,蛋白质的复性过程就是这些中间体向两个方向 尤其是处于关键部位的氨基酸 ,对蛋白质的生物学 4 选择性的演变过程,蛋白质复性效率就取决于正 功能有根本的影响 ,例如镰刀型红细胞贫血症中血 　　确折叠和变性聚集之间的竞争 。疏水链暴露后 ,肽红蛋白氨基酸的变化 。因此 ,能达到复性的蛋白质 变性应是在保持氨基酸的基本种类和顺序不变的基 链上某些具有光吸收作用的氨 基 酸 也 暴 露 于 溶 液 础上 ,由于其他因素的影响而引起的分子高级结构 中 ,会引起蛋白质紫外吸收值发生一定的变化 ,根据 αβ的变化 ,如2螺旋 、2折叠结构的增减 , 肽链的变性 这一点 ,可以对变复性过程中蛋白质的结构情况进 舒展 ,杂乱结构的增多 ,从而使蛋白质正常的生物学 行观察 。蛋白质的变性过程发生是比较迅速的 ,只 活性丧失 。蛋白质稳定性与组成中的氨基酸种类有 要几分钟 ,但复性过程却相对较慢 ,需要几个小时 , 关系 ,例如含有巯 基 的 氨 基 酸 , 最 常 见 的 是 半 胱 氨 　　因此 ,复性时要给予足够的时间 。 酸 ,会降低蛋白质在高温条件下的稳定性 ,尤其在某 + 2 + 些金属离子 , Cu 、Zn等存在时 , 蛋白质对空气中 2 蛋白质复性条件1 的氧更为敏感 , 而易发生不可逆变性, 在此基础 　　上 ,有人通过用丝氨酸 、丙氨酸替换活跃的半胱氨酸 蛋白质的复性对环境中的理化条件有很高的要 2 的方法来提高蛋白质的稳定性,这当然要在不影 求 ,复性时必须对温度 、p H 、离子强度等进行严格的 响蛋白质的生物学活性的基础上才有意义 。脯氨酸 限制 ,同时蛋白质本身的性状也对复性效率产生影 本身存在顺反两种异构形式 ,也会影响蛋白质空间 5 响 。朱慧等在研究重组人前尿激酶复性时 ,对不 　　同复性条件进行实验比较 ,发现强酸强碱均不利于 　　(( ) ) 蛋白质复性 ,偏碱 p H8 . 6,8 . 8、低温 4 ?情况下 　　11 Hevehan的研 究 表 明 , 这 一 比 例 关 系 需 随 蛋 白 质 ,浓蛋白质复性较好 。蛋白质浓度对复性也有影响 　　6 度越低 ,聚集越不易发生。原因是由于蛋白质的 浓度作调整 ,实验中还原型和氧化型巯基试剂比例 浓度上升时