2009表达gpt和EGFP基因重组山羊痘病毒的构建和鉴定.PDFVIP

一 31一 中国动物检疫 2009年第 26卷第 2期 表达 gpt和 EGFP基因重组山羊痘病毒 的构建和鉴定 南文金 1l，王清华 1，吴晓东 ，赵永刚，，王志亮 (1．中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032；2．扬州大学兽医学院，江苏扬州 225009) 摘要：在包含山羊痘病毒(Goatpoxvirus，GPV)疫苗株复制非必需区TK(Thymidinekinase)基因和背靠背启 动子的质粒 PtkPP的两个启动子下游插入EGFP(增强绿色荧光蛋白)基因，构建了质粒 PtkPegfpP和PtkPPegfp，这 两个重组质粒分别瞬时转染LT细胞，验证了启动子P11扣P7．5能成功表达EGFP基因后，在PtkPP启动子P11的下 游插入 gpt(黄嘌呤鸟嘌呤磷酸转移酶)基因和EGFP基因，构建重组质粒PtkPgpt—egfpP，该重组质粒和GPV同源重 组获得重组病毒rGPV-PtkPgpt—egfpP，利用MPA(霉芬酸)阻断核酸代谢途径筛选到稳定表达EGFP基因的重组GPV。 为进一步开展 GPV活载体疫苗的研究提供了技术平台。 关键词：重组山羊痘病毒；TK基因；gpt基因；EGFP基因 中图分类号：S852．654 文献标识码：A 文章编号：1005—944X(2009)02—0031—04 Commaefion and identificationofrecombinantgoatpoxvirus expre~inggptandEGFP geno NANWen-jin ，WANGQing-hua，wUXiao-dong，ZHAOYong—gang，WANGZhi-liang (1ChinaAnimalHealthandEpidemiologyCenter，Qingdao，266032；2CollegeofVeterinaryMedicine，Yangzhou University，JiangsuYangzhou，225009) Ab—m陡 A goatpox virusrtansfervectorPtld~P，containing the fragmentsofthenon．essentialregionwascon． structed with TK geneand theback toback promoterofgoatoox virusvaccine strain．EGFP genewasinserted into downsrteam ofthe promoter 11 or promoter7．5 to generate two individualVansfer vectorPtkPegfpP and PudPPegfo．The wto vectorswere rtansfected into LT cells．The consistence expression ofEGFP gene in the transfected cellsdemonstrated thattheforeign genecould be expressed downsrteam eihterside oftheback to back promoter．Fusion gene gptand EGFP werethen inserted into Ptl(PP downstream the late promoter 11．re— suited in htegeneration ofrtansferplasmid PtkPgpt-egfpP．The recombniant viruswasgenerated by transfection of PtkPgpt—egfpP intoLT cellsthathadbeen infectedwith goatpox virusvaccnie srtani．Thisstudy suppliedatech— nicalplatform fordeveloping goatpox viruslivevectorvaccnie． K 嘲由：recombinantGoatpOXvirus；thymidniekinase (TK)gene；