马铃薯A病毒RT-LAMP检测方法的建立.PDFVIP

中国农学通报 2015,31(11): 143-147 Chinese Agricultural Science Bulletin 马铃薯A病毒RT-LAMP检测方法的建立 1 2 1 1 1 2 刘洪义 ，辛言言 ，刘忠梅 ，杨长志 ，杨立群 ，张永江 1 （黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心/ 国家马铃薯病毒检测重点实验室，哈尔滨150001； 2 中国检验检疫科学研究院，北京100123） 摘 要：马铃薯A 病毒(potato virus A ，PVA)是一种侵染马铃薯的病毒，严重影响马铃薯的经济价值和产 量，为有效防止该有害生物的传入和扩散，建立马铃薯A 病毒RT-LAMP 检测方法，根据PVA 的外壳蛋 白基因序列设计RT-LAMP 反应的特异引物，通过实验成功建立了PVA 的RT-LAMP 特异性检测方法。 该方法检测快速，36 min 即可检测到扩增曲线；特异性强，可有效区分同样侵染马铃薯的马铃薯A 病毒 (PVA)、马铃薯V 病毒(PVV)、马铃薯Y 病毒(PVY) 以及同属的百合斑驳病毒(LMoV) ；灵敏度高，比普通 RT-PCR 灵敏度高10倍；并可通过肉眼观察浊度或颜色反应直接进行结果判断。该方法适用于现场 PVA 的快速检测。 关键词：马铃薯A 病毒；反转录-环介导等温扩增；检测 中图分类号：S412 文献标志码：A 论文编号：2014-2360 DevelopmentofART-LAMPAssayforRapidDetectionofPotatoVirusA 1 2 1 1 1 2 LiuHongyi,XinYanyan,LiuZhongmei,YangChangzhi,YangLiqun,ZhangYongjiang (TechnicalCenterofInspectionandQuarantine,HeilongjiangEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau,Harbin150001;1 2ChineseAcademyofInspectionandQuarantine,Beijing100123) Abstract:PotatovirusA(PVA)isakindofquarantinepestwhichcaninfectpotatoandcausethelossesof yieldandvalueofpotato.Inordertopreventthepestfromentryandspreading,theonesteploop-mediated isothermalamplification(RT-LAMP)methodforthedetectionofpotatovirusA (PVA)wasdeveloped.Using primerexplorersoftware,RT-LAMPprimersweredesignedoriginallyusingaconservedregioninthecoat proteincodingregionofPVA.TheamplificationcurveresultonspecificityusingPVA,PVV,PVY,LMoV, negativecontrolandwaterastemplateshowedthattheassaycouldamplifyPVAspecifically,whichwasthe sameasthefluorescentdetectionreagent(FDR)reactionresult.Thesensitivitycomparisonshowedthatthe RT-LAMP