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·３５６· 中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１３Ｍａｒ；２９（３）：３５６～６０ 网络出版时间：２０１３－３－７１４：４８　网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ１４４８．０１４．ｈｔｍｌ 线粒体通路和死亡受体通路在 中华眼镜蛇毒组分诱导 ＫＧ１ａ细胞凋亡中的作用 贺艳杰，李玉华，卢会芳，黄宇贤，黄　睿，郭坤元 （南方医科大学珠江医院血液科，广东广州　５１０２８２） ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１３．０３．０１４ 用，能够促使肝癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌以及白 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１３）０３－０３５６－０５ 血病等多种肿瘤细胞发生凋亡［２－６］。中华眼镜蛇毒 中国图书分类号：Ｒ３２９．２５；Ｒ３９２．１１；Ｒ７３３．７２０．２２；Ｒ９９６．３ 组分（ｎａｊａｎａｊａａｃｔｒａｖｅｎｏｍｃｏｍｐｏｎｅｎｔ，ＮＮＡＶＣ）是 摘要：目的　研究线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜 从中华眼镜蛇毒液中提取的具有抗肿瘤作用的成 蛇毒组分（ｎａｊａｎａｊａａｃｔｒａｖｅｎｏｍｃｏｍｐｏｎｅｎｔ，ＮＮＡＶＣ）诱导 分，本实验以ＮＮＡＶＣ为干预因素，观察其诱导ＡＭＬ ＫＧ１ａ细胞凋亡过程中的作用。方法　以人急性髓系白血病 细胞株ＫＧ１ａ细胞凋亡的作用，并初步探讨相关信 细胞株ＫＧ１ａ细胞为研究对象，采用ＡｎｎｅｘｉｎＶＦＩＴＣ／ＰＩ荧光 号通路的变化。 染色法进行凋亡细胞的形态学观察，流式细胞仪检测细胞凋 １　材料与方法 亡率，分光光度法检测 Ｃａｓｐａｓｅ９、Ｃａｓｐａｓｅ８和Ｃａｓｐａｓｅ３的 １．１　材料　 活性，ＥＬＩＳＡ法检测胞质内细胞色素 Ｃ的表达水平，流式细 胞仪分析ＴＲＡＩＬ死亡受体（ＤＲ４、ＤＲ５）和诱骗受体（ＤｃＲ１、 １．１．１　细胞株　人急性髓系白血病细胞株 ＫＧ１ａ ＤｃＲ２）的改变。结果　ＮＮＡＶＣ作用后，荧光显微镜下可见 细胞来源于中国医学科学院血液学研究所。 明显的凋亡细胞，细胞凋亡率随药物作用浓度的增加而升 １．１．２　药物　中华眼镜蛇毒组分（ＮＮＡＶＣ）由广州 高；Ｃａｓｐａｓｅ９、Ｃａｓｐａｓｅ８和Ｃａｓｐａｓｅ３蛋白被激活，胞质内细 蛇毒研究所惠赠，用 ＰＢＳ缓冲液配制成储存液备 胞色素 Ｃ的表达明显增加；流式细胞仪检测结果显示， 用。 ＮＮＡＶＣ具有降低死亡受体 ＤＲ４和诱骗受体 ＤｃＲ１的表达 １．１．３　试剂　 ＲＰＭＩ１６４０培养基（Ｈｙｃｌｏｎｅ公司， 率，而提高ＤＲ５和ＤｃＲ２的表达水平的作用。结论　线粒体 美国），胎牛血清（杭州四季青生物工程公司产品）， 凋亡通路和死亡受体通路均参与ＮＮＡＶＣ诱导ＫＧ１ａ细胞凋 ＡｎｎｅｘｉｎＶＦＩＴＣ／ＰＩ细胞凋亡检测试剂盒（南京凯基 亡的过程，这可能是 ＮＮＡＶＣ发挥抗白血病作用的机制之 生物科技发展有限公司），小鼠抗人 ＤＲ４、ＤＲ５、 一。 ＤｃＲ１、ＤｃＲ２单克隆抗体（购自美国Ｒ＆Ｄ公司），人 细胞色素 ＣＥＬＩＳＡ检测试剂盒（美国ＲＤ公司）， 关键词：白血病；中华眼镜蛇毒；ＫＧ１ａ细胞；线粒体通路；死 Ｃａｓｐａｓｅ分光光度法检测试剂盒（南京凯基生物科技 亡受体通路；凋亡 发展有限公司）。