发展先导规模之D-HPG酵素转化生物制程-eTop-工程科技推展平台.PDFVIP

行政院國家科學委員會專題研究計畫 成果報告 發展先導規模之 D-HPG酵素轉化生物製程(2/2) 研究成果報告(精簡版) 計 畫 類 別 ： 個別型 計 畫 編 號 ： NSC 99-2622-E-035-001-CC1 執 行 期 間 ：99年08月01日至 100年07月31日 執 行 單 位 ： 逢甲大學化學工程學系 計 畫 主 持 人 ： 趙雲鵬 計畫參與人員： 碩士級-專任助理人員：賴信誠 碩士級-專任助理人員：鄭暐柔 碩士級-專任助理人員：姜智彬 碩士班研究生-兼任助理人員：蔡益吉 碩士班研究生-兼任助理人員：李泓旻 碩士班研究生-兼任助理人員：方義評 碩士班研究生-兼任助理人員：陳弘岳 博士班研究生-兼任助理人員：莫卡 處 理 方 式 ： 本計畫涉及專利或其他智慧財產權，研究成果報告(精簡版)2 年後可公開查詢 中 華 民 國 100 年 10月 11 日 研究摘要(500字以內)： β-內醯胺(β-lactam) 系列半合成抗生素是目前醫藥市場上最被廣泛使用的抗 生素，而 D-p -hydroxylphenyl glycine (D-HPG)是合成這些抗生素所需要的中間 體，所以特具商業價值。以生物法來製造 D-HPG須經由兩個酵素反應步驟，首 先由酵素D-hydantoinase(HDT)將 DL-hydroxylphenyl hydantoin (DL-HPH)轉化成 N-carbamoyl-D-p -hydroxylphenyl glycine(CpHPG) ，接著再經酵素D-carbamoylase (AHL)之反應生成 D-HPG 。現今D-HPG的製造大多使用具有以上兩種酵素活性 的野生菌株 Agrobacterium radiobacter或使用重組大腸桿菌來進行生物轉化。 為了有效提升 D-HPG 生物製程的效能，因此在本計畫中，我們發展固定酵素轉 化法，與懷德生技公司合作發展先導規模之 D-HPG酵素轉化生物製程，藉以升 產業技術水準和競爭力，奠定本土生技醫藥產業之基礎。 人才培育成果說明： 本期計畫執行後，完成以下幾個工作項目： (1)發展穩定且優越的重組蛋白質生產菌株。 (2)發展重組蛋白質生產菌株菌株的接種放大程序和高細胞密度醱酵策略， 提升重組蛋白質的體積生產量。 (3)發展重組酵素固定化程序，確保重組蛋白質之穩定性。 (4)發展酵素反應器，提升生物轉化反應的效能。 (5)發展下游產物純化程序，確保產品之品質和穩定性。 參與本計劃的研發人員，包括本實驗室的研究生和懷德生技公司之研究員，皆 可以接受跨領域生物技術的訓練，其中包括基因工程技術的學習、醱酵工程技 術的訓練、菌種的改質與改善、酵素固定化、酵素反應器設計和操作、生物製 程單元操作和下游產品純化程序等；藉此也可以促進雙方的技術交流與合作， 快速整合雙邊發展的技術，確實將實驗室學理和現場實務技術予以融合，以培 育本土優越的生物技術人才，提升產業競爭力，進而落實生技產業深耕台灣之 1 目的。 技術研發成果說明： 本期計畫的技術研發成果可歸納如下： 1. 建構穩定之重組蛋白質生產菌株。 2. 本計畫成功結合開發之生產菌株、最適化的醱酵基質和饋料批次之高細胞密 度醱酵策略， HDT和 AHL重組酵素生產量可達到總蛋白質含量的 10 % 。 3. 利用實驗設計法所設計最適化的醱酵培養