细胞培养基本技术_(2).pptVIP

细胞生长状况的观察—细胞周期 细胞周期的检测方法 机械分散法 纤维成分很少的组织，如脑组织、部分胚胎组织以及一些肿瘤组织。 方法： 1.剪刀剪切，吸管反复吹打分散组织细胞。 2.组织放在注射器内通过针头压出。 3.注射器针芯挤压通过不锈钢筛网（50目、200目、400目） 剪切分离法 组织块移植培养时，将组织剪成或切成小块（1cm3）用眼科剪反复剪切组织至糊状，吸取培养液反复吹打，低速离心去上清，再分离培养。 消化分离法——胰蛋白酶消化法 用于消化细胞间质较少的软组织，如胚胎、上皮、肝、肾等，同时也用于培养的细胞。 pH 、温度、浓度、组织块大小和硬度。 0.1~0.5%，常用0.25% pH= 8 5mm3胚胎类软组织， 0.25%胰蛋白酶，37℃，20-30min即可。 钙、镁离子及血清对胰蛋白酶有抑制作用。 分次消化 EDTA较胰蛋白酶缓和，从组织环境中吸取钙、镁离子，破坏组织的完整性。 0.02%，用不含钙、镁离子的BSS配置。 不能被血清中和，用洗涤、离心方法去除。 胰蛋白酶与EDTA联合使用提高效果，1:1或1:2 慢冻程序 标准程序： 当温度在-25 ℃以上时， 1～2 ℃/min 当温度达-25 ℃以下时， 5～10 ℃/min 当温度达-100℃时，可