利用抗CTP合成酶反馈抑制筛选胞苷高产突变株-中国药科大学学报.PDF

学 报 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２００９，４０（５）：４５５－４５９ ４５５ 利用抗ＣＴＰ合成酶反馈抑制筛选胞苷高产突变株 李登奎，徐晓莉，黄雷鸣，陈　颖，窦　洁，周长林 （中国药科大学生命科学与技术学院，南京２１０００９） 摘　要　目的：通过解除对ＣＴＰ合成酶的反馈抑制，得到胞苷高产突变株。方法：以胞苷脱氨酶缺失的枯草芽孢杆菌 为出发菌株进行亚硝基胍（ＮＴＧ）诱变，用６氮杂尿嘧啶（６ＡＵ）、５氟胞苷（５ＦＣＲ）和３脱杂氮尿嘧啶（３ＤＵ）３种嘧啶结构 类似物进行抗性筛选。结果：筛选得到突变株 Ｋ２１５，研究表明其抗６ＡＵ、５ＦＣＲ和 ３ＤＵ的浓度分别是 ０９ｍｇ／ｍＬ， ３５ｍｇ／ｍＬ和４５ｍｇ／ｍＬ；突变株ＣＴＰ合成酶的活性为出发菌株的６２倍，３７℃培养８０ｈ积累胞苷可达６２ｍｇ／ｍＬ。结 论：突变株Ｋ２１５能够累积胞苷且ＣＴＰ合成酶的反馈抑制得到部分解除。 关键词　胞苷；ＣＴＰ合成酶；抗性筛选；枯草芽孢杆菌 中图分类号　Ｑ９３３　　文献标识码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２００９）０５－０４５５－０５ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｃｙｔｉｄｉｎｅｐｒｏｄｕｃｉｎｇｍｕｔａｎｔｓｂａｓｅｄｏｎｆｅｅｄｂａｃｋｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒｅｓｉｓ ｔａｎｃｅｏｆＣＴＰｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  ＬＩＤｅｎｇｋｕｉ牞ＸＵＸｉａｏｌｉ牞ＨＵＡＮＧＬｅｉｍｉｎｇ牞ＣＨＥＮＹｉｎｇ牞ＤＯＵＪｉｅ牞ＺＨＯＵＣｈａｎｇｌｉｎ ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａｉｍ牶Ｔｏｏｂｔａｉｎａｍｕｔａｎｔｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｙｉｅｌｄｏｆｃｙｔｉｄｉｎｅｂｙｄｅｃｒｅａｓｉｎｇｔｈｅｆｅｅｄｂａｃｋｉｎｈｉｂｉ ｔｉｏｎｏｆＣＴＰｓｙｎｔｈｅｔａｓｅＭｅｔｈｏｄｓ牶Ａｃｙｔｉｄｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅｄｅｆｉｃｉｅｎｔｓｔｒａｉｎｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｍｕｔａｔｉｏｎｂｙｎｉｔｒｏｓｏｇｕａｎｉｄｉｎｅ 牗ＮＴＧ牘ａｎｄｓｃｒｅｅｎｅｄｗｉｔｈｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅａｎａｌｏｇｓ牞ｔｏｏｂｔａｉｎ６ａｚａｕｒａｃｉｌ牞５ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｉｄｉｎｅａｎｄ３ｄｅａｚａｕｒａｃｉｌｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓＲｅｓｕｌｔｓ牶ＡｍｕｔａｎｔｏｆＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＫ２１５ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄ牞ｗｉｔｈｔｈｅｃｒｉｔｉｃａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｔｏ６ ａｚａｕｒａｃｉｌ牞５ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｉｄｉｎｅａｎｄ３ｄｅａｚａｕｒａｃｉｌｂｅｉｎｇ０９牞３５ａｎｄ４５ｍｇ／ｍＬ牞ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙＴｈｅＣＴＰｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅｍｕｔａｎｔｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙ５２ｆｏｌｄａｎｄｃｙｔｉｄｉｎｅｗａｓａｃｃｕｍｕｌａｔｅｄｔｏ６２ｍｇ／ｍＬａｆｔｅｒ７２ｈｆｅｒｍｅｎｔａ ｔｉｏｎａｔ３７℃Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ牶ＴｈｅｍｕｔａｎｔＫ２１５ｈａｓｈｉｇｈｅｒｃｙｔｉｄｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｉｓｐａｒｔｉａｌｌｙｆｒｅｅｆｒｏｍｔｈｅｆｅｅｄ ｂａｃｋｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｎＣＴＰｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　ｃｙｔｉｄｉｎｅ牷ＣＴＰｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ牷ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇ牷Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ ＴｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｓｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙｔｈｅＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅ牗ＮｏＳＢＫ２００９２１２３１牘牷ｔｈｅＱｉｎｇＬａｎＰｒｏｊｅｃｔｏｆＪｉａｎｇ ｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅａｎｄｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＩｎｎｏｖａｔｉｖｅＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔＰｒｏｇｒａｍｆｏｒＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｔｕｄｅｎｔｓ 　　胞苷（ｃｙｔｉｄｉｎｅ，ＣＲ）是抗肿瘤、抗病毒药物合