水解酶及氧化还原酶组织化学原理及方法.pptVIP

水解酶及氧化还原酶组织化学 原理及方法 水解酶 hydrolases 指催化底物发生水解反应的酶类 例如:磷酸酶类、酯酶类等 AB＋H2O AH＋BOH 磷酸酶类 磷酸酶类是水解磷酸化合物的酶的总称 水解磷酸酯键，释放磷酸离子，为重金属捕获而产生沉淀；或释放萘酚而为重氮盐耦联 而显色。 碱性磷酸酶：在pH9.2-9.4表现为最大活性 酸性磷酸酶：在pH5.0显示最大活性 显示法： 金属沉淀法 偶氮耦联法 碱性磷酸酶alkaline phosphatase ,AKP、ALP 在碱性范围，催化各种醇和酚的磷酸酯水解。 磷酸和R能用组化方法捕获。 钙钴法：捕获磷酸 偶氮耦联法：当R为萘酚衍生物时，捕获R 二者最终均形成有色沉淀，可作定位观察。 激活：金属离子—Mg2+ 、Mn 2+ 、Zn 2+ 、Co 2+ 抑制：Tetramisol(四咪唑)、各种醇类、L-半胱氨酸 钙钴法（金属沉淀技术 ）Gomori-Takamatus法 原理：把游离的磷酸变为盐的形式从而产生沉淀 β-甘油磷酸钠（底物）─→磷酸离子 磷酸离子+Ca2+ ─→磷酸钙（不可见） 磷酸钙+Co2+ ─→磷酸钴（不可见） 磷酸钴+S2- ─→硫化钴（不溶，可见） 条件：pH9.4 作用液： 2%巴比妥钠 3%β-甘油磷酸钠 2%无水氯化钙 2% MgSO4.