内切葡聚糖酶基因在巨大芽孢杆菌中重组表达载体的构建_百替生物资料.pdfVIP

内切葡聚糖酶基因在巨大芽孢杆菌中重组表达载体的构建 生物科学 2003 级 廖俊华 指导教师 陈 惠 教 授 摘要：以生物化学与分子生物学实验室克隆并测序的枯草芽孢杆菌C-36内切葡聚糖酶基 因（Genbank 登录号：DQ782954）为模板，通过PCR将编码信号肽的序列去除，然后与pMD18-T Vector克隆载体连接，构建pMD18-TVector亚克隆载体。对pMD18-TVector质粒先进行 BglⅡ单酶切，回收后再进行SphⅠ单酶切，通过两次单酶切胶回收内切葡聚糖酶基因（不 含信号肽），并构建巨大芽孢杆菌重组表达载体pHEC-End，将重组表达载体转化到大肠杆 菌DH5α中。通过对转化子进行菌落PCR和质粒的酶切检测证明成功构建了内切葡聚糖酶 的巨大芽孢杆菌表达载体。 关键词：巨大芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌， 内切葡聚糖酶 ，重组表达载体 ConstructionofeukaryoticExpressionVectorofthegeneof ConstructionofeukaryoticExpressionVectoro