转基因动物的培育.ppt

转基因动物 * * 实验目的 了解转基因动物培育的基本过程、方法 将特定的目的基因从某一生物体分离出来，进行扩增和加工，再导入另一动物的早期胚胎细胞中，使其整合到宿主动物的染色体上，在动物的发育过程中表达，并通过生殖细胞传给后代。这种在基因组中稳定整合有人工导入外源基因的动物称为转基因动物（transgenetic animal）。 小鼠6～7周龄时性成熟，性周期为4～5天，妊娠期为19～21天；哺乳期为20～22天；特别有产后发情便于繁殖的特点，一次排卵10～23个（视品种而定），每胎产仔数为8～15只，一年产仔6－10胎，属全年、多发情性动物，繁殖率很高，生育期为一年。 十周龄的一对小鼠 较大者44克，较小者29克 其中较大者转有大鼠的生长激素基因 （1）DNA的制备 （2）受精卵的制备 （3）显微注射 （4）受精卵的转移 （5）转基因鼠的确定 实 验 过 程 一、DNA的制备 1.密度梯度离心：取3克CsCl加入离心管中，然后加入2.4ml回收的DNA溶液，待充分溶解，加入矿物油封口。 20℃，4万转/分离心48小时。 2.透析：把离心管固定在支架上，分部收集流出液，凝胶电泳确定DNA所在的管，集中DNA溶液，透析。 3.制成适当浓度：琼脂糖凝胶电泳，估计待测DNA溶液的浓度，用缓冲液稀释样品到1－3μg/ml，分装后－70℃保存。 （一）鼠的准备与要求 二、受精卵的制备 （二）超排卵与取卵 孕马血清（PMS）其有效成分为卵泡刺激素（FSH） 人绒毛膜促性腺激素（hCG） 1 超排卵 2 受精卵的收集 将取下的输卵管集中到盛有M2培养基的试管中，在含透明质酸酶的M2培养基中使卵成单个细胞，将卵转至含M16的培养皿内，置37℃，二氧化碳孵箱中。 三、DNA显微注射 1、显微注射装置 2、持卵针和注射针的制备 3、显微注射 四、受精卵的转移 1、在手术前夜令受体母鼠与已结扎输精管雄性小鼠合笼，次日晨取出雌鼠备用； 2、受精卵的转移 五、转基因鼠的确定 DNA的提取 PCR扩增 Southern杂交 Northern杂交 表达产物的检测 优点： 转基因范围广，转移基因大，可达数百kb；且转基因不含任何病毒基因组片段，绝对安全 。 缺点：整合机制不明确，无规律随机整合，多拷贝整合导致转基因不表达；整合位点随机会造成转动物基因组的重排、突变、易位缺失等；需显微操作仪，技术性要求强。