[教育学]分子生物学实验八.pptVIP

分子 生物学实验 实验八 凝胶电泳回收和纯化DNA片段 第3周 分子生物学实验仪器设备简介和实验有关内容介绍 第4周 从植物组织提取DNA 第5周 从动物组织提取DNA 第7周 原核细胞质粒DNA的提取 第8周 核酸的琼脂糖凝胶电泳 第9周 紫外分光光度法测定核酸含量和纯度鉴定 第10周 限制性内切酶酶切质粒DNA 第11周 凝胶电泳回收和纯化DNA片段 第12周 细菌感受态的制备 第13周 质粒DNA的转化 第14周 目的基因的PCR扩增与检测 第15周 原核蛋白质SDS电泳 第17周 考试 1、实验目的： 将酶切所需要的DNA片段进行回收，纯化。 2、实验原理： 柱子吸附DNA，洗涤、洗脱 Marker PCR Marker 酶切 Marker 酶切质粒pMD18-T-kfNHX with BamHI 和HindIII 清洗电泳槽，利用新鲜的电泳液后进行电泳。 用低电压进行纯化的电泳。 电泳后的胶一定要在干净的塑料薄膜上进行切割操作。 割胶一定要割得尽可能的小。 DNA 纯化 1.长波长UV照射下，判定DNA位置，用手术刀割下含有要回收的DNA，放入1.5ml的离心管中。 2.按照100ul胶块加700ul溶胶液的比例，室温溶胶(or55度),期间偶尔摇动；装柱，9000rmp,30s;去掉废液。 (非割胶的酶切质粒溶液中加入60 μl 的水后，加入700ul溶胶液混匀，装柱，9000rmp，30s;去掉废液。) 3.加500ul漂洗液，12000rmp，30s。重复一次。去掉废液后，12000rmp,2min。 4.柱子放入新的1.5ml离心管中。 5.在膜中央加洗脱液25-30ul,室温放置1-2min，12000rmp,1min。 加入适量的B溶液