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实验室技术比武 实践操作 考核要求 1实践考试的总体原则 A理解原理：必须掌握基础知识 B操作规范：掌握关键环节 C结果符合要求 D熟悉意外事故的应急处理 2实践考试的项目和范围 A艾滋病HIV抗体的ELISA检测(手工操作） B痰涂片－结核分支杆菌抗酸染色（现场操作演示） 3实践考试的参考资料 A医学实验室作业指导书 B实验室检验标准 1全国艾滋病检测规范 2全国临床检验操作规程 4实践考试的考核方式 A现场盲样测试 B检测结果判断和质控分析 C现场提问 D突发事件的处理 E其它 5实践考试的操作要点 A按照标准规范操作 B符合生物安全要求 C了解检验关键环节 D知晓意外事故处理流程 E掌握结果判断方法 F质控检测符合要求 6实践操作细节 艾滋病HIV抗体的ELISA检测(手工操作） HIV 抗体检测的要点 筛查试验阳性不能出阳性报告。 严格遵守实验室标准操作程序。 严格按照试剂盒说明书操作。 注意防止样品间交叉污染。 常规HIV 抗体检测的方法和程序 酶联免疫试验（ELISA） 基本要求 艾滋病检测实验室技术人员需要经过相关的业务培训，经考核合格者由相关机构发给培训证书，持证上岗。非卫生专业技术人员不得从事艾滋病检测工作。 艾滋病筛查实验室至少由3名医技人员组成，其中具有中级卫生技术职称人员至少1名。负责筛查试验的技术人员需具有2年以上从事病毒性疾病血清学检测工作经验，接受过艾滋病确证实验室组织的检测技术培训，并获得培训证书。 操作个人防护要求 进实验室前要摘除首饰，修剪长的带刺的指甲，以免刺破手套。 在工作区内不应配带戒指、耳环、腕表、手镯、项链和其他珠宝。 长发应束在脑后。 离开实验室前必须脱去隔离衣。工作完毕，用肥皂和流动水洗手。 HIV 抗体筛查检测流程 筛查和复检： 对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告HIV 抗体阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认 HIV 抗体检测操作 ◎HIV抗体实验的结果受操作影响很大，每个步骤包括加样，温育，洗涤，显色，酶标仪读数均应认真负责才能充分发挥ELISA的高灵敏，强特异的优点。◎因此,必须按照实验项目的标准操作程序规范操作。 HIV抗体检测技术要求 必须建立标准操作程序 禁止肉眼判读！ 保证酶标仪，洗板机正常运转 保证加样器准确 选择高质量的与加样器配套的TIP头 使用有效期内的试剂 保证样品离心质量 操作重点：加样 ◎微量移液器按规定的量加入微孔板的1/3处，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。 ◎每次加样应更换吸嘴，做到一人一吸头;干吸头预先在血清中抽吸三次。 操作重点：温育 ◎抗原抗体反应需要在一定温度下（37°C），经过一定的时间才能达到反应的平衡点◎温育一般采用能使反应液温度迅速达到平衡的水浴法。 A 放在水浴箱的隔板上 B 放在温箱的湿盒里。水要浸至板条的1/3处，不可将板条叠加放置。 操作重点：注意事项 保证实验室温度，室温过低有可能造成吸光度值偏低。 本试验的敏感性很高，如果操作不当很容易出现非特异性反应。在操作过程中，尤其应注意洗涤过程。洗涤彻底可减少假阳性的机会。 必须用酶标仪进行测定，不得目测结果。使用酶标仪时，要避免酶标孔内产生气泡，影响判读结果。 操作重点：试验假阳性 样品加错位置，标本搞错 洗板机设置不当，洗板时洗涤液溢出，污染其它孔 洗板机内部管道有真菌生长 实验中，实际孵育时间过长，温度过高 待测标本溶血或含有血细胞。 待测标本长菌或其它原因混浊。 其它原因：〔与试验操作无关〕． 操作重点：花板 空白和阴性，阳性对照以及室内质控孔结果正常，而标本的阳性率很高，每板除对照孔外，有时阳性高达数孔之多，而大多数出现弱阳性结果。这就是试验中所说的“花板”问题。 这种现象对检验结果的正常判断造成了很大的影响。 “花板”产生的原因： 检测过程存在问题： 首先考虑检测过程中的操作是否存在问题；通过完善的质量控制措施，可以查找可能存在的操作问题，或排除操作造成“花板”的可能。 预防“花板” 1 1 抽取样本时应抽出足够量的血液标本，按比例加抗凝剂，便于离心，得到足够的血清（血浆）。 2 血液标本应置于室温下1～2h，使血液凝固收缩，然后离心检测或让血液过夜后再检测。这样才能使血液充分收缩，让标本中非特异性物质所致假阳性率降至最低。 3 检测之前，加大离心转速，尽量延长时间，使血细胞和纤维蛋白充分沉淀，让血细胞与血清彻底分离。 预防“花板” 2 4 加样时不能加入红细胞或纤维蛋白，要按照操作说明书去做