真菌毒素测定法.PDFVIP

2020 年版第一次征求意见稿 真菌毒素测定法 本法适用于药材、饮片及中药制剂中黄曲霉毒素B 、B 、G 、G 、赭曲霉毒 1 2 1 2 素A 、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、展青霉素、伏马毒素B 、B 及T-2 毒素的测 1 2 定。除另有规定外，按下列方法测定。 一、黄曲霉毒素测定法 本法系用液相色谱法和液相色谱- 串联质谱法测定药材、饮片及中药制剂中的 黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B 、黄曲霉毒素B 、黄曲霉毒素G 和黄曲霉毒素G 1 2 1 2 总量计）。 第一法 （液相色谱法） 本法系用高效液相色谱法（通则0512 ）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒 素（以黄曲霉毒素B 、黄曲霉毒素B 、黄曲霉毒素G 和黄曲霉毒素G 总量计）， 1 2 1 2 除另有规定外，按下列方法测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇- 乙腈-水（40 : 18 : 42 ）为流动相；采用柱后衍生法检测，①碘衍生法：衍生溶液 为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml 使溶解，用水稀释至 1000ml 制 成），衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70℃； ②光化学衍生法：光化学 衍生器 （254nm ）；以荧光检测器检测，激发波长λex = 360nm （或365nm ），发射 波长λex = 450nm 。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。 混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液（黄曲霉毒素 B 、黄曲霉毒素B 、黄曲霉毒素G 和黄曲霉毒素G 标示浓度分别为1.0μg/ml、 1 2 1 2 0.3μg/ml、1.0μg/ml 、0.3μg/ml ）0.5ml，置 10ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作 为贮备溶液。精密量取贮备溶液 1ml，置25ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即 得。 供试品溶液的制备 取供试品粉末约15g （过二号筛），精密称定，置于均质 瓶中，加入氯化钠3g，精密加入70% 甲醇溶液75ml，高速搅拌2 分钟（搅拌速 度大于 11000 转/分钟），离心5 分钟（离心速度2500 4000 转/分钟），精密量取 上清液15ml，置50ml 量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜 （0.45μｍ） 滤过， 量取续滤液20.0ml 离心10 分钟 （离心速度4000 转/分钟），精密量取上 清液20ml ，通过免疫亲合柱，流速每分钟3ml，用水20ml 洗脱 （必要时可以先 1 / 13 2020 年版第一次征求意见稿 用淋洗缓冲液10ml 洗脱，再用水10ml 洗脱），弃去洗脱液弃去，使空气进入柱 子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml 量瓶中，并用加甲 醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜 （0.22μm ）滤过，取续滤液，即得。 测定法 分别精密吸取上述混合对照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl， 注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准 曲线。另精密吸取上述供试品溶液20～50μl，注入液相色谱仪，测定峰面积， 从 标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B 、