第四章 药物屏定量分析与分析方法验证.ppt

二、需验证的分析项目 1. 鉴别试验； 2. 杂质定量或限度检查； 3. 原料或制剂中有效成分含量测定； 4. 制剂中其它成分（降解产物、防腐剂等）的测定； 5. 溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法。 3. 系统适应性试验 色谱柱的理论板数（n） 分离度 R≮1.5 拖尾因子 T=0.95 ~ 1.05 重复性 取各品种项下的对照品溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准差应不大于2.0% 4. 测定法 外标法 分别配制供试品溶液（x）和对照品溶液（r），对照品溶液的浓度为供试品溶液浓度的±10%。测得相应的峰面积为Ax和Ar。 讨论： 外标法操作、计算简单； 要求实验条件稳定：灵敏度、流动相流速、组成等； 采用定量环或自动进样为好，进样量准确，有较好的重复性，保持溶液浓度恒定，减少进样误差。 内标法 在同一次实验操作中，被测物的质量响应值与内标物的质量响应值的比值是恒定的，不随进样体积或操作期间所配制的溶液浓度的变化而变化，根据这一原理能够通过内标法得到未知样品较准确的定量结果。 内标法加校正因子 配制校正因子测定液 对照品（CR ） 内标物 （CS ） 混合 进样 AR AS 配制供试品溶液 供试品（Cx) 内标物 （CS ′) 混合 进样 Ax AS′ 在给定的色谱条件下 含内标物的对照品溶液 含内标物的供试品溶液 校正因子 内标对比法 如：CS = CS′ 讨论： 内标物的选择：化学性质稳定，在达到分离度要求前提下，tR与供试品的接近； 内标法较外标法准确，但操作和计算较复杂； （二）气相色谱法 原理： 样品中各组分在固定相与载气间分配，由于各组分的分配系数不同而分离。 2.一般要求（Ch.P2005） 载气：N2 ； 进样：直接进样或顶空进样； 色谱柱：填充柱、毛细管柱； 进样温度：直接进样，高于柱温30~50℃； 进样量：不大于数微升； 检测器：常用氢火焰离子化检测（FID），检测温度一般高于柱温，不得低于150℃，以免水气冷凝，常用250~300℃。 不可改变的条件 可改变的条件 固定液种类 检测器类型 特殊指定的色谱柱材料 色谱柱规格、型号、固定液涂布浓度、载气流速、检测器灵敏度、柱温、进样量等。 3. 系统适应性试验（参见HPLC） 4. 测定法 由于GC进样在1μl左右，易产生误差，故常采用内标法 第三节 药品质量标准分析方法验证 一、目的及要求 证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求。药品质量标准起草时，合成工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，分析方法需经验证。方法验证过程和结果均应记载在药品标准起草和修订说明中。 验证内容有：准确度、精密度（重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性 三、验证内容 （一） 准确度（accuracy） 准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。 测定回收率R（recovery）的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。 1. 含量测定方法 （1）原料药的含量测定 用已知的对照品或供试品进行测定 回收率％＝ 测得量 加入量 ×100％ 1. 含量测定方法 （2）制剂的含量测定 用已知的对照品或供试品进行测定； 向已知制剂含量加入“已知量的被测物”。 回收率％＝ 测得量－本底量 加入量 ×100％ 反应摩尔比：本品：碘：硫代硫酸钠=1:1:2 b. 剩余量滴定法（回滴定法） 以司可巴比妥钠的含量测定为例 10ml 溶解 取本品0.1g 250ml碘瓶 精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml+HCl 5ml→ 密塞振摇1分，暗处放置15分→微开瓶塞加KI T.S 10ml →密塞摇匀→ Na2S2O3滴定液（0.1mol/L）滴定→近终点淀粉指示（蓝色消失） 空白试验校正。 定量过量 Br2 + 2KI 2KBr + I2 I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6 1 ： 2 1 ： 1 司可巴比妥 ∶Br2 ∶Na2S2O3 = 1 ∶ 1 ∶2 对于溴滴定液 空白 样品 被测药物的量 对于硫代硫酸钠滴定液 空白 样品 被测药物的量 二、光谱分析法 1.特点 灵敏度高，可达10－4～10－7g／ml； 准确度高，相对误差为2%～