高效液相色谱法原理及其.ppt

虽然流动相是影响组分的保留值的一个重要因素，但是保留值的大小的决定因素是组分与流动相和固定相分子间的作用力…… * 高压输液泵按性能可以分为两类，第一种是恒流泵， * * 按性能分类的第二种是：恒压泵 * * * * * * * * 通常是在实验结束后，到关机之前有两个小时的时间用来冲洗整个仪器管路系统。 * 它可以通过仪器编程，用色谱工作站来控制自动进样器的工作，实现自动进样。进样重复性高，适合大量样品的分析，节省人力。 * 为了延长色谱柱的使用寿命，保证保留值与分离度的重现性，在使用色谱柱的过程中应对色谱柱进行维护与保养 * 长时间连续地使用色谱柱，可能有强滞留组分附着于填料上，引起保留值变化、柱效下降，可用冲洗的方法对柱进行再生。 * 长时间连续地使用色谱柱，可能有强滞留组分附着于填料上，引起保留值变化、柱效下降，可用冲洗的方法对柱进行再生。 * * * 噪声低、基线漂移小、灵敏度高、线性范围宽、重复性好是对检测器的一般要求。 * 紫外检测器的使用率占70%左右。 * 紫外检测器的使用率占70%左右。 * 3。使用的流动相应与仪器系统的原保存溶剂能互溶。 * * （2）配制供试品溶液，进样，通过图谱得到主成分色谱图的峰面积，并计算平均值。 供试品峰面积AX 1 2 第一针 第二针 供试品平均峰面积 （3）配制对照品溶液，进样，通过图谱得到主成分色谱图的峰面积，并计算平均值。 对照品峰面积AX 1 2 第一针 第二针 对照品平均峰面积 （4）根据外标法计算公式，将对照品1的峰面积分别代入两份样品中求得样品含量。 公式： 供试品1-1%= 供试品1-2%= （5）根据外标法计算公式，将对照品2的峰面积分别代入两份样品中求得样品含量。 公式： 供试品2-1%= 供试品2-2%= （6）最后通过两份样品的平均结果得到盐酸左氧氟沙星滴眼液的含量。 谢谢！ * * 所以人们又称它为高压、高速、高效或现代液相色谱法。 * * * 1巴(bar)=0.1兆帕(MPa)=100千帕(KPa)=1.0197 公斤/平方厘米 把所有的单位换成公制单位就可以算出：1bar≈14.5psi * 所以人们又称它为高压、高速、高效或者现代液相色谱法。 * * 流动相的极性大于固定相极性时，称为反相色谱。反之称为正相色谱。 * * * * * * * * * * * * 储液装置用于存储足够量的HPLC级的溶剂，流动相进入高压泵之前必须脱气。常用第四种。 * 储液装置用于存储足够量的HPLC级的溶剂 * * 三、高压输液泵的性能参数 用于分析型输液泵的流量相对标准偏差在0.075%～0.3% 流量范围是0.010～10ml/min 流动相流速是1～3ml/min 最高工作压力可达34.47～41.36MPa(300～500bar,5000～6000psi) 四、梯度洗脱装置 ※梯度洗脱：又称为梯度淋洗或程序洗脱。在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，梯度性地改变洗脱液的组成。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。 ※梯度洗脱的原理： 流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k，并使样品中的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。 ※梯度洗脱的优点： 1.缩短分析周期； 2.提高分离能力； 3.峰型得到改善，减少拖尾； 4.增加灵敏度。但有时引起基线漂移。 ※（三）进样装置 一、手动注射进样器 二、六通阀进样装置 三、自动进样器 进样阀的基本要求： 1. 耐高压 2. 进样量准确 3. 进样重复性好 4. 无流量和压力波动影响 进样阀的保护措施： 1. 在泵和进样阀之间安装在线过滤器，防止机械杂质进入进样阀。 2. 以缓冲液作流动相时，定期用水清洗进样阀，尤其是在色谱仪关机前。 自动进样器的组成部分： 1. 进样阀 2. 样品环管 3. 进样针头 4. 样品瓶 5. 支架 ※（四） 色谱柱 色谱柱是液相色谱系统进行分离的核心部分，试样中各组分在色谱柱中被分离。 色谱柱的要求： ※柱效高：通过减小填料粒度来提高柱效 ※选择性好：可通过改变固定相的种类和流动相的种类来改变色谱柱的选择性。 分析速度快 一、柱材料及规格 1．柱材料：色谱柱由柱管和固定相组成，柱管用不锈钢制成。 HPLC柱的填料材料有硅胶、以硅胶为基质的键合相、氧化铝和有机聚合物微球等。 2．※柱规格：粒度通常