《GBT12395-1990-食物中烟酸的测定方法》.pdfVIP

中华人民共和国国家标准 食物中烟酸的测定方法 GB/T 12395—90 Method for determination of niacin in foods ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 1 主题内容与适用范围 本标准规定了用微生物方法测定食物中的烟酸含量。 本标准适用于各类食物中烟酸的测定。 2 原理 某一种微生物的生长,必需某些维生素,例如 L.arabinosus17-5 之生长需要烟酸,培 养基中若缺乏这种维生素该细菌便不能生长。在一定条件下,该细菌生长的情况, 以及它 的代谢物乳酸的浓度是与培养基中该维生素含量成正比的, 因此可以用酸度或浑浊度的测 定法来测定样品中烟酸的含量。本方法检出限为 10ng。 3 试剂 本实验所用之水均需蒸馏水。所用试剂均需分析纯。 3.1 甲苯。 3.2 盐酸: 3mol/L 溶液。 3.3 盐酸: 1:5(V/V)溶液。 3.4 硫酸: 0.5mol/L 溶液。于 2000mL 的烧杯中先注入 700mL 水,将 28mL 硫酸沿烧杯壁慢 慢 倒入水中,用水稀释至 1000ml。 3.5 冰乙酸: 0.02mol/L 溶液。 3.6 氢氧化钠: 40％溶液。溶200g 氢氧化钠于水中,稀释至 500mL 。 3.7 氢氧化钠: 0.1mol/L 溶液。溶 4g 氢氧化钠于水中,稀释至 1000mL。 3.8 乙醇: 25％(V/V)溶液。 3.9 酪蛋白: 不含维生素。 3.9.1 不含维生素酪蛋白的制备 3.9.1.1 乙醇处理法: 称取 100g 酪蛋白细粉于烧瓶中,加入 300mL95 ％乙醇,在水浴中加 热回流 1h,减压抽滤,弃去滤液,再加入乙醇回流,如此反复 3～4 次,至滤液呈微黄色或 无色,取出在烘箱内 70～80℃干燥即可。 3.9.1.2 酸洗法: 称取 250g 酪蛋白,置于 5L 容器中,慢慢加入 3.6L 水以防止成块,加入浓 盐酸 2.77mL,搅拌浸泡 3min 。用虹吸管除去上层清液。加入3.6L 水,再加入浓盐酸 2.77mL, 如此反复 8 次后,再加水 3.6L,加入 55.5mL12mol/L 氨水,放置过夜,使酪蛋白溶解成浆状。 用布过滤,于滤液中慢慢加入约 50mL3mol/L 盐酸,调至 pH4.5,使酪蛋白全部沉淀,过滤。 弃去滤液,用 50～60℃热水冲洗数次,挤压去水,放入烤箱内于 100℃烤干即可。 3.10 酸解酪蛋白: 称取 50g 不含维生素的酪蛋白于 500mL 烧杯中,加 200mL3mol/L 盐酸, 于 压力蒸汽消毒器内 10.3 ×14**4Pa(151b/in**2)压力下水解 6h 。将水解物转移至蒸发皿内, 在沸水浴上蒸发至膏状。加 200mL 水使之溶解后再蒸发至膏状,如此反复 3 次, 以除去盐酸。 注意每次蒸发时不可蒸干或使之焦糊, 因为蒸到这样程度,水解液所含营养物已被破坏。 用 40 ％氢氧化钠调节pH 至 3.5, 以溴酚蓝作外指示剂。加20g 活性炭,振摇,过滤。如果滤 液不呈淡黄色或无色,可用活性炭重复处理。滤液加水稀释至 500mL,加少许甲苯于冰箱中 保存。 3.11 胱氨酸、色氨酸溶液: 称取 4gL-胱氨酸和 1gL-色氨酸(或 2gDL-色氨酸)于 800mL 水 中, 加热至 70～80℃,逐滴加入 1:5(V/V)盐酸,不断搅拌,直至完全溶解为止。冷至室温,加 水稀释至 1000mL。加少许甲苯于冰箱中保存。 3.12 腺嘌呤、鸟嘌呤、尿嘧啶溶液: 称取硫酸腺嘌呤(纯度为 98 ％) 、盐酸鸟嘌呤(生化 试剂) 以及尿嘧啶各 0.1g 于 250mL 烧杯中,加 75mL 水和 2mL 浓盐酸,然后加热使其完全溶 解, 冷却,若有沉淀产生,加盐酸数滴,再加热,如此反复,直至冷却后无沉淀产生为止, 以水稀 释至 100mL。加少许甲苯于冰箱中保存。 3.13 D-泛酸钙、对氨基苯甲酸、盐酸吡哆醇溶液: 称取 D-泛酸钙、对氨基苯甲酸、盐 酸吡哆醇各 10mg 于烧杯中, 以水溶解并稀释至 1000mL,将此液置于棕色试剂瓶中,加少许甲 苯于冰箱中保存。 3.14 核黄素、盐酸硫胺素、生物素溶液: 溶解 1mg 生物素结晶于 100mL0.02mol/L 乙酸中, 取此液 4mL(