Akt信号通路活化在曲妥珠单抗耐药机制意义的研究.PDFVIP

·５６８· 中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１３Ａｐｒ；２９（４）：５６８～７３ 网络出版时间：２０１３－４－１６１３：３８　网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ１３３８．０２７．ｈｔｍｌ ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号通路活化在曲妥珠单抗耐药机制意义的研究 陈　曦，王　晗，欧阳学农，吴晶晶，解方为 （南京军区福州总医院肿瘤科，福建 福州　３５００２５） ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１３．０４．０２７ 腺癌的疗效好，患者的无病生存期明显延长，但另有 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１３）０４－０５６８－０６ 将近５０％Ｈｅｒ２阳性患者对曲妥珠单抗治疗不敏 中国图书分类号：Ｒ３２９２５；Ｒ３４５５７；Ｒ７３７９０５；Ｒ９７９１ ［３］ 感 ，大部分 Ｈｅｒ２阳性患者在经过 １年的曲妥珠 摘要：目的　探讨磷脂酰肌醇３激酶／丝苏氨酸蛋白激酶 单抗治疗后，即会对其产生耐药性。曲妥珠单抗的 （ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ）信号转导通路激活是曲妥珠单抗耐药的重要靶 ［４－５］ 耐药机制较为复杂 ，其中磷脂酰肌醇３激酶／ 点之一，为乳腺癌曲妥珠单抗耐药的靶向治疗提供理论基 础。方法　对人乳腺癌细胞株ＢＴ４７４连续处理建立了耐曲 丝苏氨酸蛋白激酶（ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ）信号转导通路激活 妥珠单抗的耐药亚株 ＢＴＨｅｒＲ，ＦＩＳＨ法对耐药细胞株 ＢＴ 被视为曲妥珠单抗耐药的重要机制之一［６－７］。本研 ＨｅｒＲ做 Ｈｅｒ２表型分析，ＭＴＴ法检测曲妥珠单抗对 ＢＴ４７４ 究从ＰＩ３Ｋ信号通路上曲妥珠单抗可能发生耐药机 和ＢＴＨｅｒＲ细胞的体外增殖抑制情况，流式细胞仪检测曲妥 制的重要基因ｐＡｋｔ表达为切入点，通过ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ 珠单抗干预后细胞的凋亡变化，ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ抑制剂 ＬＹ２９４００２ 抑制剂ＬＹ２９４００２抑制曲妥珠单抗耐药乳腺癌细胞 干预细胞后Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ｐＡｋｔ表达。结果　耐药细胞 ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ的活性，探讨曲妥珠单抗的耐药机制，为 株ＢＴＨｅｒＲＨｅｒ２基因表达为强阳性；曲妥珠单抗干预细胞 进一步提高乳腺癌曲妥珠单抗靶向治疗疗效提供理 ７２ｈ后，细胞的体外增殖受到抑制且随着浓度的升高而增 论基础。 强；经曲妥珠单抗处理后比较 ＢＴ４７４与 ＢＴＨｅｒＲ细胞凋亡 １　实验材料 率，差异具有显著性（Ｐ＜００１）；曲妥珠单抗仅能抑制ＢＴ４７４ 的Ａｋｔ蛋白磷酸化，ＬＹ２９４００２则能同时抑制 ＢＴ４７４的ＢＴ １．１　主要实验试剂　人乳腺癌细胞株ＢＴ４７４购自 ＨｅｒＲＡｋｔ蛋白磷酸化。结论　曲妥珠单抗耐药细胞Ａｋｔ蛋 中国科学院上海细胞库。曲妥珠单抗购自美国罗氏 白磷酸化活化，ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ抑制剂ＬＹ２９４００２能明显抑制曲妥 公司。ＲＰＭＩ１６４０培养基和胎牛血清购自美国Ｈｙ 珠单抗耐药细胞Ａｋｔ蛋白磷酸化，ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号转导通路与 Ｃｌｏｎｅ公司，ＥＤＴＡ胰蛋白酶购自美国Ｇｉｂｃｏ公司。 曲妥珠单抗耐药存在明确相关性。 青、链霉素溶液购自上海碧云天生物技术有限公司。 ２ ２５ｃｍ 细胞培养瓶、９６孔培养板和６孔培养板购自 关键词：曲妥珠单抗；ＬＹ２９４００２；ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ；乳腺癌细胞； 美国Ｃｏｒｎｉｎｇ公司。二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）和ＭＴＴ购