miRNA与先天性巨结肠相关性的研究进展.doc

作者简介：罗波，男，硕士研究生，研究方向：先天性巨结肠 通讯作者：刘远梅，女，主任医师，教授，E-mail：yuanmei116@ miRNA与先天性巨结肠相关性的研究进展 罗波1，刘远梅1，姜琳耀1 （遵义医学院附属医院 小儿外科 遵义 563000） 摘要：先天性巨结肠（Hirschsprung’s disease ，HD)，又称为无神经节细胞症（Aganglionosis），其主要病理改变是在胚胎发育过程的5-12周，由于神经脊细胞迁移障碍导致末端肠壁区域神经节细胞功能异常或缺如[1]，是小儿最常见的先天性肠道动力性疾病。HD的全球发病率约为出生婴儿的1/5000，其中男性发病率为女性的4倍，是一种多基因与环境共同作用的复杂疾病，目前病因尚未完全阐明，如何早期筛查及诊断仍是研究的重点。本文就miRNA与先天性巨结肠相关性研究作一综述，以了解miRNA作为诊断先天性巨结肠生物标志物的研究现状以及发展方向。 关键词：先天性巨结肠；miRNA；生物标志物；研究进展 中图分类号: R726．1 文献标示码：A 1.miRNA研究现状概述 miRNA（微小RNA，microRNA），是一类小的，长度约19-25nt，非编码蛋白质的RNA分子，通过参与转录后调控发挥生物学功能。研究发现，miRNA约占人类基因组数量的1%。1993年在对秀丽新小杆线虫发育过程的研究中发现了第一个miRNA，命名为Lin-4，并发现了Lin-4通过与Lin-14的3′UTR相互作用来调节线虫的发育[2]。miRNA间是相互联系的，通常一个miRNA可调控多个靶基因，一个基因也可受多个miRNA调控。miRNA调控机制主要有降解靶mRNA和抑制靶mRNA翻译两种方式，当miRNA的“种子区域”（即miRNA的5′端第2至8位上核苷酸序列）与靶mRNA的3′UTR完全互补时，可使其降解；不完全互补时可抑制其翻译过程，大部分miRNA属于后者。据最新的生物信息学预测，miRNA参与调节一半以上的蛋白质编码基因。 大量研究表明miRNA可以通过精细地调节基因的表达而参与细胞的发育、分化、增殖、调亡以及应激反应等生物学过程，其功能异常能导致复杂疾病（肿瘤、心血管疾病、糖尿病、精神分裂症、阿尔茨海默症、帕金森病和双极障碍等）的发生。目前对HD的miRNA的差异表达研究较少，生物信息学预测发现多种HD的相关蛋白为miRNA的靶蛋白，而HD的发生与细胞的迁移和分化密切相关，研究人员试图了解是否存在特异miRNA调控相关蛋白的表达参与HD的发生。 2.miRNA与HD发病的机制研究 到目前为止，仅有为数不多的几篇文献报道了miRNA与HD的相关性，这些研究发现部分miRNA通过调控靶蛋白影响细胞的迁移和分化而参与HD的发病，也有少部分miRNA与HD无相关性。 2.1．部分miRNA通过抑制细胞的迁移和分化参与HD的发病 miR-200家族对细胞的迁移和分化能力有着重要的调控作用，与多种疾病的发生密切相关[3,4]，是否miR-200家族成员miR-141和miR-200a通过调节细胞的迁移和分化参与HD的发病。Tang W等[5]则首次证实了miR-141对HD的调控机制，他们的研究发现，HD患者的病变结肠组织miRNA-141表达下调，CD47/CUL3表达上调，使293T和SH-SY5Y细胞的miR-141表达下调可上调CD47/CUL3的表达，并导致相应细胞的增殖和迁移受抑，下调CD47/CUL3的表达，则其对细胞的影响消失，这显示了miR-141可通过负调控CD47/CUL3而影响相应细胞的迁移和分化，进而参与HD的发病；采用硫化测序PCR（Bisulfite sequencing PCR, BSP）对miR-141 基因进行检测，发现在病变结肠组织中miR-141启动子区域CpG岛甲基化，其具体机制仍需进一步研究。miR-200a为miR-200家簇另一成员，与miR-141拥有共同的种子序列。miR-200a同样被证实与HD有关，在2014年Li H等[6]的研究中发现HD患者病变结肠组织的miRNA-200a表达下调，显示了miR-200a极有可能参与HD的发病过程，进一步在细胞水平下调miRNA-200a的表达水平，发现293T 和SH-SY5Y细胞系的增殖和迁移都明显降低，但细胞周期及细胞凋亡无明显影响，提示miRNA-200a可能通过抑制细胞增殖和迁移参与HD的发病。通过miRBase, PicTar and TargetScan等靶基因预测算法对miRNA-200a和miRNA-141靶基因进行预测，得出可能性最高的两个靶基因：PTEN和CXCL12，而 PTEN[7]在HD患者病变肠管的粘膜和粘膜下层神经节中表达明显降低，