miRNA-21对其靶基因PTEN在前列腺癌中表达调控机制的研究.doc

miRNA-21对其靶基因PTEN在前列腺癌中表达调控机制的研究 肖黎 【1】 金艳阳【2】 佟明【2】 （1.辽宁医学院，辽宁锦州 121001； 2.辽宁医学院附属第一医院，辽宁锦州121001） 通讯作者：佟明(1967-)，男，教授，医学博士，主要从事泌尿系肿瘤及相关研究。E-mail：tongmingir@163.com 【摘要】 目的 观察前列腺癌组织和细胞中miRNA-21和 PTEN的表达情况，探讨miRNA-21对PTEN的调控。 方法：应用实时荧光定量PCR和Western blot 检测正常前列腺组织、前列腺癌组织、非依赖性前列腺癌PC-3细胞中miRNA-21和PTEN的mRNA表和蛋白质表达水平。在前列腺癌PC-3细胞中通过转染miRNA-21 inhibitor成功抑制MiRNA-21表达后，实时荧光定量PCR和Western blot 检测PC-3细胞中PTEN表达水平。结果：miRNA-21在前列腺癌组织中的相对表达量为0.421±0.166，明显高于正常前列腺组织0.033±0.018，（t=6.6，P0．05）。miRNA-21 inhibitor转染PC3细胞后miRNA-21在空白组、转染组和阴性对照组的相对表达量分别为0.516±0.213,0.117±0.044,0.392±0.171, 转染组与空白组及阴性对照组比较差异有统学意义（F＝13.1，q =7.05、4.89，P0.05）。PTEN mRNA在正常前列腺组织、前列腺癌组织的相对表达量分别为1.534±0.385,0.376±0.232，正常前列腺组织高于前列腺癌组织差异有统计学意义（t=5.8，P0．05）；PTEN蛋白在正常前列腺组织、前列腺癌组织中的相对表达量分别为2.010±0.386和0.571±0.143，差异具有统计学意义（t =12.3，P0．05）。miRNA-21 inhibitor 转染PC-3细胞后，PTEN mRNA在空白组、转染组和阴性对照组组织中的表达差异不显著，但其蛋白的相对表达量分别为0.399±0.185,0.826±0. 197,0.442±0.149，转染组与空白组及阴性对照组比较差异有统学意义（F＝13.9，q = 4.79、4.2，P0.05）。结论 前列腺癌组织中miRNA-21的表达上调，在转录后水平抑制PTEN表达，；miRNA-21有可能成为前列腺癌治疗的新靶点。 【关键词】 前列腺癌；miRNA-21；PTEN 前列腺癌的发生发展涉及一系列的基因组的改变，抑癌基因PTEN（ phosphatase and tensin homologue）丢失在前列腺癌的发生及进展中起关键的调控作用[1-2]。miRNA（microrRNA）广泛存在于动植物中，它对生物体生长发育和分化调控起着重要作用，其失衡表达亦可促进多种肿瘤的发生发展[3]； 。大样本筛查证实miRNA-21在多种实体肿瘤中均出现高表达现象[4]。miRNA-21的高表达可以提高前列腺癌细胞的凋亡抵抗、活力、及侵袭力[5]，而我们以前的研究也证实下调miRNA-21在前列腺癌表达后，细胞增殖能力减弱。本研究中旨在探讨miRNA-21对抑癌基因PTEN在前列腺癌中可能的调控作用。 资料方法 1、.组织收集及细胞培养 11份正常前列腺组织、6份前列腺癌组织均取自本院电切手术或前列腺穿刺标本并经病理证实。全部病例术前均未接受放化疗，标本采集后迅速放至液氮中-80℃冷冻，-80℃。前列腺癌PC-3系细胞（中国医学科学院基础医学研究所细胞中心），用含有用含有10%的胎牛血清的RPMI 1640培养基(美国Gibco公司)，37 2、.RT-PCR：Trizol法提取细胞及组织中的总RNA，紫外分光光度计检测总RNA的吸光度A260和A280值，并保证A260/A280比值1.8-2.1以控制其纯度。取2u希文，勿与英文混用。下同g总RNA作为模板，miRNA-21、U6及编码基因PTEN的逆转录反应体系：2.5mmol/L dNTP 2ul ,1umol/L逆转录引物1ul，4U/ul Quant反转录酶（Takara公司）1ul, 5×逆转录酶缓冲液4ul，加无RNA酶水至反应体积为20ul。37℃温浴60 min，95℃5 min，收集cDNA，-20℃保存。miRNA-21茎环状逆转录特异引物和miRNA内参照U6引物由Takara公司合成。miRNA-21及PTEN PCR反应体系：取l ul cDNA为模板，SYBR GreenReal Time PCR Master Mix(Takara公司)9ul，上下游引物各2ul，无RNA酶水加至20ul。PCR反应参数：预变性95℃ 30s（1次）