检测瓜氨酸和非对称二甲基精氨酸化学发光方法.PDFVIP

ISSN 1007 -7626 中国生物化学与分子生物学报 http :/ / cjbmb ． bjmu ． edu ． cn 20 13 3 年 月 CN 11-3870 / Q Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 29 (3 ):290 ～ 297 · · 技术与方法 检测瓜氨酸和非对称二甲基精氨酸的化学发光方法 1 ) 1 ) 1 ) 1 ) 2 ) 1 )* 张 明 ， 赵志敬 ， 屠慧惠 ， 沈文婷 ， 王学忠 ， 胡 广 1 ) 2 ) ( ， 3 12000 ; ， 3 12000 ) 北京大学工学院绍兴技术研究院 浙江绍兴 绍兴科锐捷生物科技有限公司 浙江绍兴 (ADMA) ， 、 摘要 非对称二甲基精氨酸 是内源性一氧化氮合酶抑制剂 被公认是一种与心血管疾病 、 ． 糖尿病 性功能障碍和肾功能衰竭等多种疾病密切相关的危险因子 本文通过化学发光法检测瓜 氨酸或ADMA 经鸟氨酸氨基甲酰转移酶(ArcB)和氨基甲酰磷酸激酶(ArcC)偶联生成的 ATP ，并 ． 1) 对该方法检测的灵敏度和动态范围进行了初步评价 从绿脓杆菌中克隆了鸟氨酸氨基甲酰转移 ， ， ，TLC 酶和氨基甲酰磷酸激酶 转化大肠杆菌实现高效可溶性表达 用镍柱亲和纯化得到融合蛋白 ． 2) ADMA 薄层层析法定性和测氨法定量验证了融合蛋白活性 用化学发光法检测了瓜氨酸或 经相 ATP ， ， 应酶偶联反应后的产物 并且对实验进行了优化 结果表明两者都能在偶联酶作用下催化释放 ATP ， 0. 1 mol / L ， ADMA ， 相应的底物浓度检测下限为 μ 检测结果接近正常生理血清中