P450基因组成型过量表达与棉铃虫对拟除虫菊酯抗性.pdfVIP

P450 基因组成型过量表达与棉铃虫 对拟除虫菊酯的抗性1 杨亦桦，陈松，武淑文，岳丽娜，吴益东 南京农业大学植物保护学院昆虫系，江苏南京（210095 ） E-mail ：wyd@ 摘 要：细胞色素P450 所介导的解毒作用增强是棉铃虫YGF 品系对拟除虫菊酯产生抗性的 主要机理。本研究从棉铃虫YGF 品系的脂肪体中分离、克隆到两个新的P450 基因：CYP9A12 和 CYP9A14 （分别编码531 和 530 个氨基酸）。 采用实时定量 RT-PCR 技术，比较了 CYP9A12 ，CYP9A14 ，CYP6B7 以及CYP4G8 的mRNA 在棉铃虫YG 品系（对拟除虫菊酯 类杀虫剂氰戊菊酯有7 倍的抗性）和YGF 品系（在实验室中用氰戊菊酯筛选YG 品系而得， 对氰戊菊酯具有 1690 倍的抗性）末龄幼虫中的表达水平。YGF 品系脂肪体中的CYP9A12 和CYP9A14 和CYP6B7 的mRNA 表达水平和YG 品系相比分别增加了433 倍、59 倍、9.3 倍，而CYP4G8 没有过量表达。和YG 品系相比，YGF 品系中肠中的CYP9A12 和CYP9A14 的mRNA 分别有 19 倍和4.3 倍的过量表达，而CYP6B7 和CYP4G8 没有过量表达。本研究 表明棉铃虫对拟除虫菊酯的抗性与多个P450 基因（至少CYP9A12,CYP9A14 ，CYP6B7 ）的 组成型过量表达有关。 关键词：棉铃虫，细胞色素P450 ，mRNA 表达，拟除虫菊酯，抗药性 1. 引 言 细胞色素 P450 酶系在昆虫内源性物质的调控以及外源性物质的代谢方面具有很重要的 作用[1] 。昆虫P450 介导的解毒作用增强是昆虫对于不同杀虫剂产生抗性的重要机制[1-2] 。在 [3-10] 许多昆虫中，P450 基因的组成型过量表达与昆虫的抗药性有关 。 棉铃虫 Helicoverpa armigera (Hübner)是一种重要的棉花害虫，许多国家的棉铃虫都对拟 除虫菊酯类杀虫剂产生了严重的抗性[11-12] 。最近的研究表明，P450 介导的解毒作用增强是 亚洲地区棉铃虫对拟除虫菊酯类杀虫剂产生抗性的主要机制[13-15] 。在棉铃虫对拟除虫菊酯的 一个抗性品系（PAK ）中，增效醚（PBO ）可使该品系对溴氰菊酯的抗性从 223 倍下降到 21 倍，并发现 PAK 抗性品系末龄幼虫中肠微粒体离体代谢溴氰菊酯的能力显著高于敏感品 [13] 。然而，棉铃虫对拟除虫菊酯抗性的氧化代谢的分子机制还远远没有研究清楚。 系（SCD） CYP6B2，CYP6B6 和 CYP6B7 基因是从澳大利亚的棉铃虫种群中克隆到的，因CYP6B7 mRNA 在一个拟除虫菊酯抗性品系中过量表达而被认为与抗性有关[16-17] 。但是这一结论并 不可靠，因为在他们所使用的棉铃虫抗性品系中 P450 介导的解毒作用增强并没有被证明是 对拟除虫菊酯抗性的重要机制。采用 RT-PCR 技术，从另一个澳大利亚棉铃虫种群中获得了 8 个新 P450 基因的部分序列，并且通过 Northern 印迹分析其mRNA 在抗性和敏感品系中的 表达水平，只有 CYP4G8 的 mRNA 在抗性品系中存在 2 倍的过量表达，而其他的 P450 基 因或者未被检测出有表达或者在品系间的表达水平很相近[18] 。这 8 个 P450 基因是否在棉铃 [2] 虫对拟除虫菊酯类杀虫剂抗性中起作用仍然是不确定的 。 Yang 等[13]证实氧化解毒代谢增强是棉铃虫拟除虫菊酯抗性品系（YGF ）对拟除虫菊酯 产生抗性的主要机理。在本研究中，通过 RT-PCR 和 RACE 技术从 YGF 品系中分离到两个 新的 P450 基因（CYP9A12 和 CYP9A14 ），并采用实时定量RT