糖类蛋白质脂肪的鉴定.pptVIP

实验 生物组织中糖类脂肪和蛋白质鉴定 思考题： 1、糖类、脂肪、蛋白质鉴定的实验原理 2、常见的还原糖有哪些？取材的要求 3、斐林试剂的组成，使用时的注意事项 4、双缩脲试剂的组成，使用时注意事项 5、斐林试剂和双缩脲试剂的比较 6、脂肪鉴定中酒精的用法和作用 7、脂肪鉴定中能否直接观察颜色？借助什么来观察？ 8、如何鉴定淀粉，颜色反应如何 2、常见的还原糖有哪些？取材的要求 还原糖：可被氧化充当还原剂的糖。 (常见的有：葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖) 注意：蔗糖不是还原糖 3、斐林试剂的组成，使用时注意事项 斐林试剂：甲液：0.1g/mL的NaOH溶液 乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液 使用注意事项：等量混合，现配现用（ NaOH+CuSO4） 1步骤： 样液制备:（取材5g，加入石英砂和 5ml水） (1)取样液2ml于试管中 (2)加入新配制的斐林试剂1ml（甲液和乙液等量混合均匀后再加入）盛有50-65℃温水的大烧杯） (3)水浴加热2min左右(（4）观察颜色变化（浅蓝色→棕色→砖红色） 注意事项：（1）材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果》梨》白萝卜。 思考：西瓜、甘蔗、甜菜可以吗？为什么？ （2）试剂：斐林试剂(等量混合、现配现用) 甲液：0.1g/mL的NaOH溶液 乙液：0.05g/ml的CuSO4溶液 4、双缩脲试剂组成，使用时注意事项 2步骤： （1）试管中加样液2mL （2）加双缩脲试剂A液1mL（造成碱性环 境），摇匀 （3）加双缩脲试剂B液4滴，摇匀 （4）观察颜色变化（紫色） 注：①样液浓度不宜过高，以免实验后黏住试管壁，洗不干净。 ②B液不能过量，多余的B液会与A液反应成蓝色，而掩盖生成的紫色。 6、脂肪鉴定中酒精的用法和作用 7、脂肪鉴定中能否直接观察颜色？借助什么来观察？ （2）步骤 材料的选取：含脂肪量高的组织，如花生的子叶。 ①取材： 取一粒浸泡过的花生种子，去掉种皮 ②切片 ③制片：（切片越薄越好）将最薄的花生切片放在载玻片中央 ④染色：滴2～3滴苏丹Ⅲ染液，染色3min，用吸水纸吸去染液，再滴体积分数50%的酒精洗去浮色，再用吸水纸吸去多余的酒精（苏丹Ⅲ易溶于酒精中，避免影响实验结果），滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片 ⑤镜检观察：光学显微镜对光→低倍镜寻找着色圆形小颗粒→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒 8、如何鉴定淀粉，颜色反应如何 用试管取2mL待测组织样液，向试管内滴加1～2滴碘液，观察颜色变化。 即：还原糖中的醛基（–CHO）被 Cu(OH)2氧化， Cu(OH)2被还原成砖红色的Cu2O沉淀 蛋白质的鉴定原理： 蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。 蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性溶液（即A液可造成碱性环境）中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫色络合物。 * * 1.实验原理： 化学试剂+有机化合物→特定的颜色 (1) 还原糖 + 斐林试剂 水浴加热砖红色 沉淀 (2) 脂肪+苏丹Ⅲ→橘黄色 脂肪+苏丹Ⅳ→红色 (3) 蛋白质 + 双缩脲试剂 → 紫色 1.点拨： 还原糖 + 斐林试剂 砖红色沉淀 可溶性还原糖与斐林试剂发生作用，可生 成砖红色的Cu2O沉淀。 （放在盛有50-65℃温水的大烧杯） 水浴 加热 颜色变化：浅蓝色 棕色 砖红色 双缩脲试剂组成： A液：0.1g/mL的NaOH溶液 B液：0.01g/mL的CuSO4溶液 使用注意事项： 先加A液1mL于样液中， 再加B液4滴于样液中 （1）蛋白质 + 双缩脲试剂 → 紫色 添加顺序方法 反应现象 反应条件 鉴定物质 成分 B液 A液 乙液 甲液 双缩脲试剂 斐林试剂 5.比较斐林试剂和双缩脲试剂 0.1g/mLNaOH 同甲液 0.01g/mLCuSO4 0.05g/mLCuSO4 还原性糖 蛋白质 等量混合后再加入 先加A液1mL，摇匀， 再加B液4滴 50-65℃水浴加热 砖红色沉淀 紫色络合物 不需加热，摇匀 3.脂肪+苏丹Ⅲ→橘黄色 脂肪+苏丹Ⅳ→红色 4、淀粉 + 碘→蓝色 加1~2滴碘液 1.鉴定生物组织中可溶性还原糖的试剂 A．斐林试剂 　 　 B．双缩脲试剂 C．苏丹Ⅲ染液 　 D．苏丹Ⅳ染液 2.能与斐林试剂反应产生砖红色沉淀的是 A．淀粉 B．果糖　C．蔗糖　D．纤维素 3.下列哪个实验用到显微镜（ ） A可溶性还原糖的鉴