甲醇溶液对木瓜蛋白酶催化活性的影响-亚热带植物科学.PDFVIP

2005,34(1):1-4. Subtropical Plant Science 甲醇溶液对木瓜蛋白酶催化活性的影响 初志战，黄卓烈，巫光宏，何 平，詹福建 （华南农业大学生命科学学院，广东 广州 510640 ） 摘 要：试验结果表明，木瓜蛋白酶在一定浓度甲醇溶液中水解酪蛋白的活性显著上升；动力学测定表明， 该酶在甲醇溶液中Km 下降；在甲醇溶液中木瓜蛋白酶催化酪蛋白水解反应的最适pH 为8.5，最适温度为70℃； 紫外差示光谱研究表明，在甲醇溶液作用下木瓜蛋白酶的二级结构发生了变化；荧光发射光谱研究表明，木 瓜蛋白酶在甲醇溶液中发射峰位向低波长移动，荧光峰值明显增高。 关键词：木瓜蛋白酶；有机溶剂；酶活；动力学；构象 中图分类号：Q556+ .5 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2005)01-0001-04 Effect of Methanol on Catalytic Activity of Papain CHU Zhi-zhan, HUANG Zhuo-lie, WU Guang-hong, HE Ping, ZHAN Fu-jian （College of Life Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, Guangdong China ） Abstract: The catalytic activity of papain could increase rapidly when treated with methanol. Results of kinetics experiments indicated that the value of Km and Vmax declined. The optimum pH of methanol solution was 8.5 and the optimum temperature was 70℃ for catalytic activity of papain. The experimental results of differential ultraviolet spectra of papain showed that the conformation of papain changed in methanol solution. The fluorescence emission spectra showed that the fluorescence intensity of papain increased and the fluorescence emission peak changed to lower wavelength in methanol solution. Key words：papain; organic solvent; enzyme activity; kinetics; conformation 木瓜蛋白酶在工农业上已广泛应用。据统计，在 20 世纪 90 年代初全世界对木瓜蛋白酶的需求量 达到 650t/年[1] 。非水相催化虽然在上世纪60 年代便有探索，但只是近二十年才对这一领域进行较全面 的研究，并取得一些进展[2] 。有关木瓜蛋白酶在甲醇溶液中的催化作用，前人的研究仅集中在动力学 方面[3-6]，对构象变化方面未见深入研究。本试验结合前人研究，对木瓜蛋白酶在甲醇影响下的最适反 应条件（浓度、pH 、温度）、动力学参数变化及构象变化等进行了探讨。 1 材料与方法 供试木瓜蛋白酶粗酶（部分纯化）、木瓜蛋白纯酶（结晶）购自美国 Sigma 公司；考马斯亮蓝 G250 购自 Fluka 公司；L-cys 、甲醇为国产分析纯试剂。蛋白质含量的测定参照 Bradford 法；木瓜蛋白酶活 性测定参考方焕等[7] [8] [9] 和罗远秀 ，采用陶宙