脐带间充质干细胞及其外泌体对高糖损伤及炎症状态脂肪细胞的作用.PDF

学校代码： 10023 学 号： 20 1001059 脐带间充质干细胞及其外泌体对高糖损伤 及炎症状态脂肪细胞的作用 专业年级： 北京协和医学院临床医学专业20 10 级 姓 名： 陈美婷 导 师： 肖新华（教授） 北京协和医学院 临床学院（北京协和医院） 内分泌科 完成日期： 2018 年6 月 目录 摘要…………………………………………………………………………………3 Abstract ……………………………………………………………………………5 前言…………………………………………………………………………………7 参考文献……………………………………………………………………………10 材料与方法…………………………………………………………………………13 结果…………………………………………………………………………………28 讨论…………………………………………………………………………………37 结论…………………………………………………………………………………40 参考文献……………………………………………………………………………41 论文综述……………………………………………………………………………44 附录一 中英文缩略词表 …………………………………………………………52 附录二 Real-time PCR 引物列表 ……………………………………………… 54 致谢…………………………………………………………………………………55 独创性声明…………………………………………………………………………56 学位论文版权使用授权书…………………………………………………………56 2 脐带间充质干细胞及其外泌体对高糖损伤及炎症状态脂肪细胞的作用 摘要 研究背景 胰岛素抵抗是 2 型糖尿病 （T2DM ）的重要特征，高糖毒性、脂肪组织慢性炎 症状态是导致胰岛素抵抗的重要原因。目前，脂肪细胞胰岛素抵抗模型以 3T3-L1 为主，人脂肪细胞胰岛素抵抗模型及高糖损伤现象报道不多。间充质干细胞（MSCs ） 是一类具有多向分化潜能的非造血干细胞，基础研究已证实 MSCs 通过免疫调节、 组织修复等作用改善T2DM 及其并发症。MSCs 分泌的外泌体（exosomes ）内含有 大量生物活性物质，介导细胞之间的物质转运和信息传递，并模拟 MSCs 的功能。 相较于骨髓、皮下脂肪来源的MSCs，脐带来源的MSCs （hUC-MSCs ）免疫原性更 低、受供体影响更少，但hUC-MSCs 及其外泌体对高糖损伤、炎症状态的脂肪细胞 作用尚需研究。 研究目的 1. 比较脐带、皮下脂肪来源的MSCs 的生物学特性及功能；2. 比较3T3-L1 与 脂肪来源 MSCs （hAMSCs ）成脂分化及胰岛素抵抗模型的建立效果；3. 探索 hUC-MSCs 来源的外泌体对胰岛素抵抗的脂肪细胞作用，为hUC-MSCs 及其外泌体 治疗T2DM 提供可能的理论依据。 研究方法 1. 生长良好的MSCs 分别向成骨、成脂分化，通过流式细胞仪进行免疫表型鉴 定，比较多向分化能力及细胞表面抗原表达结果。从hUC-MSCs 的条件培养基中通 过超速滤过法分离提取外泌体，通过透射电镜形态观察及Western Blot 标志蛋白进 行鉴定。2. 用 10ng/ml 的TNF-α、35mmol/L 葡萄糖干预诱导成熟的人脂肪细胞、 3T3-L1 细胞，比较两种脂肪细胞的胰岛素抵抗情况。3. 使用hUC-MSCs 来源的外 泌体干预炎症状态、高糖损伤