肿瘤免疫微环境景观分析方案研究背景.PDF

肿瘤免疫微环境景观分析方案 研究背景 肿瘤免疫、肿瘤微环境成为研究热点 常规方法难以满足肿瘤微环境分析的要求 基因检测和流式方法丢失了形态信息 (Phenotype with no morphology) Science 杂志评选癌症免疫治疗为 2013 年度首要研究突破（2013 Science）；肿瘤的发生发展与其所处的微环境密切相关，涉及基 分子水平的检测（测序，qPCR ）和流式细胞分析能够分辨出足够 质、血管、淋巴管、免疫细胞等因素相互作用。这些细胞群体对 多的基因型或细胞型组分，但是无法判断这些组分在组织原位的 肿瘤或抑制、或促进，随其激活状态和相对肿瘤的位置差异而有 空间位置关系，而这种定位关系（context ）对理解其在组织微环 所不同（2013 Nature) 。 境中的作用是至关重要的。 常规免疫组化无法分辨足够多的细胞表型 肿瘤微环境涉及要素众多、关系复杂 (Morphology with no phenotype) 组织病理成像能够完整呈现组织原位的形态信息，但受制于传统 染色成像方法，通常只能标示很少的靶标（≤3 ），无法完整呈 如左图所示，T细胞与其相邻的树突状细胞、巨噬细胞和肿瘤细 现多样化的组织信息。 胞之间借助不同配体和受体的相互作用实现不同的共刺激和共抑 制调节（2013 Clin Cancer Res ）；同时配体和受体间的信号传导 多标记景观分析是肿瘤微环境研究的有效手段 也存在交叉互作（右图），例如B7-H1, CD28和CTLA4三者均可 与B7-1相结合（2013 Nature Reviews Immunology ）。 (Phenotype with morphology) 癌变相关的关键分子在微环境中演绎不同的分子事件。肿瘤细胞 摆脱免疫系统的监控识别，逃离Tc细胞的杀伤；成纤维细胞和巨 噬细胞从抑制生长状态被肿瘤细胞驯化为促瘤状态（如TAMs分 泌大量的蛋白酶、细胞因子和生长因子促进肿瘤生长）；MDSCs 和Treg扰乱DCs抗原递呈，抑制T细胞和B细胞增殖活化和NK细胞 的毒杀作用，打乱免疫平衡；CAFs纤维化激活表达VEGF促进血 景观（Landscape ）分析是在一张组织样本上复染多种分子标记 管新生；低氧和高组织液压等非细胞因素也有着重要作用（2013 （7种），将多元信息呈现在同一画面内，配合软件定量分析， Nature Medicine ）。 对组织微环境中的目标分子或细胞及其相关因子进行全面分析。 1 肿瘤免疫微环境景观分析方案 技术特点 景观分析方法的三个技术突破 突破3. InForm 细胞、组织表型识别和定量统计 景观分析包括三个步骤： InForm 软件采用流程化的定量病理分析界面，将图像中记录的光 1.多标记免疫荧光染色（解决一抗抗体来源冲突的问题）； 谱信号和生