间纯化步骤进行快速筛选.PDFVIP

GE Healthcare 应用指南 28-9192-12 AB 疏水相互作用层析 采用HiTrap HIC Selection 试剂盒对可放大的重组EGFP 中 间纯化步骤进行快速筛选 摘要 本文中我们采用HiTrap™ HIC Selection 试 剂盒，配合使用 Butyl Sepharose High Performance （同HiTrap Butyl HP ）对七个具 有不同疏水特性的1 ml HIC 柱进行筛选。 本次筛选的目的是根据设定的过程目标对 重组绿色荧光蛋白（EGFP ）的中间纯化步 骤进行筛选，以获得最适的介质和操作条件 实验目的 组合。设定的过程目标包括了高分辨率和高 收率（至少80% ）以及动态结合载量至少达 本研究的目的是快速建立一种中间纯化步 到20 mg 蛋白/ml 介质，同时还对工艺的放 骤，用于含组氨酸标签的，波谱位移的绿色 大提出要求。 荧光蛋白（EGFP ）的中间纯化步骤，并使 该纯化满足预先设定的过程性能目标即使 本次所采用的筛选策略证实有效，且最终纯 纯化能够有足够的分辨率，高产率（至少 化方案非常适合于稳健的大规模工艺的放 80% ）以及至少20 mg 蛋白/ml 介质的动态 大。此外，HiTrap Butyl HP 的引入使得整个 结合载量。此外，该纯化方案应该可以轻松 方案在选择性上更新颖，从而使整个试剂盒 地进行放大处理。 的应用延伸至更广泛的领域。 用HiTrap HIC Selection 试剂盒进行筛 这些从试剂盒应用中得到的结论和各种便 选 利反应出HiTrap HIC Selection 试剂盒在筛 选 HIC 介质和操作条件中可作为一种快速 许多因素都会影响蛋白与 HIC 介质的相互 可靠的方法。该试剂盒还证实其在各种其他 作用，因此通常一项纯化方案的建立之初最 蛋白的纯化方面也同样有效，因此具有更加 好是对初始介质和操作条件先进行筛选。通 广泛的应用。 过将七种具有不同疏水特性的 HIC 介质预 填充入层析柱中制作成方便的层析柱规格， 介绍 这种扩展的HiTrap HIC Selection 试剂盒可 以很快地筛选出最佳的介质和适合的操作 疏水相互作用层析（HIC ）是通过分子在其 条件。一旦最佳条件被验证，可以将纯化过 表面疏水性的差异进行分离的，在当今的蛋 程放大至更大的实验室层析柱。这一步是将 白分离中该技术已经非常成熟。由于疏水相 该纯化步骤发展成全规模纯化过程的起始 互作用层析具有多功能性和高选择性的特 步骤。 点，因此常用于各种物质的中间或最终纯化 阶段。 表1 HiTrap HIC Selection 试剂盒中的七种预填充有不同HIC 介质的HiTrap 1 ml 柱 配 体 密 度 预装柱 介质 （μmol/ml 介 主要介质特性 质） HiTrap Butyl-S FF Butyl-S Sepharose 6 Fast 10 属于HIC 介质中疏水性最弱的介质。 Flow2 能在较低盐浓