大鼠外周血内皮祖细胞构建纳米生物探针的磁共振成像实验研究.docVIP

PAGE PAGE 1 大鼠外周血内皮祖细胞构建纳米生物探针的磁共振成像实验研究 曹爱红1，2 石红建1 聂芳1 张宇3 （1、210009 南京，东南大学附属中大医院放射科，江苏省分子影像与功能影像实验室；2、2210006 徐州，徐州医学院第二附属医院放射科3、东南大学生物科学与医学工程系） 目的: 建立稳定的体外分离培养、诱导分化大鼠外周血内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs），及应用纳米磁探针三氧化二铁(Fe2O3)-精氨酸(arginine)复合物体外标记EPCs构建纳米生物探针的方法，磁共振（MR）进行标记细胞成像。方法: 抽取SD大鼠外周血,应用Ficoll密度梯度离心的方法获得单个核细胞,同时应用VEGF和bFGF 诱导,使之向内皮细胞分化,以免疫细胞化学鉴定贴壁细胞的内皮标志CD31,CD34,Flk21和vWF。制备Fe2O3-arginine复合物。对EPCs进行磁探针标记，普鲁士蓝染色显示细胞内铁，四氮噻唑蓝（MTT）比色试验评价磁探针标记EPCs后对细胞生长状况的影响，流式细胞分析检测标记、未标记细胞的细胞凋亡。应用MR的T1WI、T2WI、T2*WI三个序列进行细胞群成像。结果:经VEGF和bFGF诱导后的EPCs的内皮标志CD31,CD34,Flk21和vWF在不同时段呈阳性表达。普鲁士蓝染色可见铁颗粒位于细胞质内，标记率接近100％；MTT比色试验示Fe2O3-arginine标记后第3d、4d、5d，标记的细胞组的光吸收值与未标记组比较，差异无统计学意义；流式细胞分析结果显示Fe2O3-arginine标记后细胞凋亡与未标记细胞间差异无统计学意义。磁共振成像（MRI）显示标记的细胞群信号强度的变化较未标记细胞群信号降低，以T2*WI的信号强度变化率最大，标记后7d的信号强度变化率较标记后1d者下降。结论:大鼠外周血中含有EPCs,在体外特殊诱导环境下,可定向分化为内皮样细胞。Fe2O3-arginine可以有效标记EPCs构建纳米生物探针，且对EPCs的活力、增殖等生物学特性无明显影响。临床应用型1.5T MR可在体外进行标记细胞群成像，间接反映大鼠EPCs的数量和分裂增殖状态。 关键词: 内皮祖细胞;纳米生物探针；内皮细胞;分化；离体；标记；磁共振成像 中图分类号; Magnetic resonance imaging experimental study of nano-bioprobe construction of endothelial progenitor cells which were isolationed from rat peripheral blood labeled with superparamagnetic iron oxide CAO Ai-hong*，SHI Hong-jian，NIE Fang，ZHANG Yu * Department of Radiology，Zhong Da Hospital，Southeast University，Jiangsu Key Laboratory of Molecular Imaging and Functional Imaging， Nanjing 210009，China Corresponding author：TENG Gao-jun，Email：gjteng@ 【Abstract】 Objective To investigate the isolation , culture , proliferation and differentiation of endothelial progenitor cells ( EPCs) from rat circulating blood and to study of magnetic resonance imaging of nano-bioprobe which wereconstructed with endothelial progenitor cells and superparamagnetic iron oxide(SPIO). Methods The mononuclear cells（MNCs）were isolated f rom SD rat peripheral blood , and EPCs were selected by adherence method，the expression of cell markers was assessed using immunohistochemistry. Fe2O3 was incubated with arginine t