hMMS2基因对结肠癌细胞耐药逆转的影响1.PDFVIP

HEREDITAS (Beijing) 2014 年*月, 36(*): w hMMS2基因对结肠癌细胞耐药逆转的影响1 1 1 1 1 1 2 1 张蕾 ，隋御 ，王婷 ，李利坚 ，李元杰 ，金彩霞 ，徐方 1.宁夏医科大学检验学院，宁夏生殖与遗传重点实验室，银川 750004 ； 2 . 同济大学医学院转化医学研究中心，上海 200072 摘要：为探讨hMMS2 （Human methyl methanesulfonat e sensitive mutant 2 ）基因对人结肠癌细胞耐药逆转的影响，文章 以人高分化耐奥沙利铂结肠癌细胞（THC8307/L-OHP ）为实验材料，采用脂质体-质粒转染技术构建了带有干扰目的基 因hMMS2 的miRNA 片段并携带绿色荧光蛋白标记重组质粒 （pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-MMS2 ）的细胞系，通过实时 荧光定量PCR （qRT-PCR ）和免疫荧光技术 （Immunostaining technique ）检测该细胞系的干扰效率。选择hMMS2 低表 达具有统计学意义的上述细胞系作为实验组细胞，同时将未曾作过处理的THC8307/L-OHP 细胞作为空白对照组，转染 绿色荧光蛋白空质粒 （pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR ）的THC8307/L-OHP 细胞作为阴性对照组，以噻唑蓝比色分析实验 （MTT colorimetric analysis assay ）、克隆形成实验（Colony formation assay ）对3 组细胞的存活率和克隆形成率进行检 测，结果显示：实验组细胞的奥沙利铂半数抑制浓度(Half inhibition concentration ，IC50) 、耐药指数(Resistance index， RI)及克隆形成率（Colony -forming efficiency ，CFE ）均比对照组细胞明显降低(P ＜0.05)，而相对逆转率（Relative rever se efficiency ，RRE ）增高(P ＜0.05)，提示实验组细胞增殖能力减弱；以罗丹明123 实验(Rhodamine 123 assay)结合倒置 荧光显微镜、流式细胞仪检测技术等观测细胞的凋亡变化，结果显示，实验组细胞的凋亡率较对照组细胞显著增高(P ＜0. 05) ；两对照（空白、阴性）组间并无细胞增殖或凋亡的显著性差异。研究结果提示：下调hMMS2 基因表达可逆转人高 分化耐奥沙利铂结肠癌细胞对L-OHP 的耐药性并促进结肠癌细胞的凋亡。 关键词：RNA干扰；铂类耐药；hMMS2 ；人高分化耐奥沙利铂结肠癌细胞 （THC8307/L-OHP）；细胞凋亡 Roles of hMMS2 gene in reversing the oxaliplatin tolerance of human colon carcinoma cells 1 1 1 1 1 2 1 Lei Zhang , Yu Sui , Ting Wang , Lijian Li , Yuanjie Li , Caixia Jin , Fang Xu 收稿日期：2013-10-12；修回日期：2014-01-29 基金项目：国家自然科学基金项目（编号31360251 ）；教育部“春晖计划”项目（编号：Z2011056 ）；银川市 应用研究开发计划项目（编号：银财发（2012 ）249 ）资助 作者简介：张蕾，在读硕士研究生，专业方向：DNA 损伤与修复。E-mail:2427084464@ 通讯作者: 徐方，教授，博士生导师，研究方向：DNA 损伤与修复。E-mail:xufang@ 1. Ningxia Key Laboratory of Reproduction and Genetics, College of Inspection, Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China; 2. Center for Translational Medicine, School of Medicine, Tongji University, Shanghai 200072, China Abstract ：I